Cellules tumorales circulantes et mélanomes métastatiques : étude comparative CellSearch/EPISPOT PS100B

Introduction La detection des cellules tumorales circulantes (CTCs) peut etre importante dans la prise en charge des malades atteints de melanomes metastatiques (MMM). Les CTCs sont heterogenes et seules les CTCs viables sont responsables de la dissemination metastatique ; peu de methodes permettent actuellement de les detecter. L’objectif de notre travail a ete d’evaluer par une methode innovante (EPIthelial immunoSPOT ou EPISPOT) le nombre de CTCs vivantes chez des MMM et de comparer les resultats obtenus avec ceux de la technique de reference (CellSearch ® ou CS). Materiel et methodes Cette etude prospective, comparative, monocentrique a ete realisee chez 35 MMM (stade IV AJCC) et 20 volontaires sains. Le nombre de CTCs chez chaque sujet a ete determine en aveugle a l’aide des deux methodes. Pour chaque prelevement, un controle interne a ete realise avec des cellules provenant de la lignee WM-266-4. Le marqueur proteique retenu pour l’analyse par EPISPOT a ete la proteine S100B. Apres depletion des cellules CD45+, les prelevements sanguins ont ete deposes sur une membrane de nitrocellulose recouverte d’anticorps anti-PS100. Apres 48 heures d’incubation, les immunospots ont ete comptes a l’aide d’un microscope a fluorescence, chacun d’eux correspondant a une CTC viable secretrice de PS100B. Les marqueurs CD146, HMWMAA, DAPI, CD45 et CD34 ont ete utilises pour definir les CTCs par le systeme CS. Resultats Le systeme CS a permis de detecter au moins 1 CTC chez 31,4 % (11/35) des MMM et au moins 2 CTCs chez 20 % d’entre eux (7/35). La technique EPISPOT a permis de detecter au moins 1 CTC viable chez 51,4 % (18/35) des MMM et au moins 2 CTCs chez 40 % d’entre eux (14/35). Avec un cut-off standard  ≥ 2 CTCs, le systeme EPISPOT avait une meilleure sensibilite que le systeme CS ( p  = 0,035). Une mediane de 1 CTC (etendue 0–900) a ete detectee par EPISPOT et de 0 CTC (etendue 0–4937) par le systeme CS dans le groupe MMM. Il n’y avait pas de difference statistiquement significative dans la specificite des deux methodes. Discussion La technique EPISPOT est basee sur la secretion de marqueurs proteiques specifiques par les CTCs apres une courte phase de culture cellulaire. Elle a deja ete utilisee pour la detection des CTCs fonctionnelles dans les cancers du sein, du colon et de la prostate. A notre connaissance, elle n’a jamais ete proposee dans le melanome. Les resultats de notre etude montrent qu’elle a une sensibilite superieure a celle de la methode immunomagnetique de reference. Conclusion Il s’agit de la premiere etude evaluant la technique EPISPOT dans le melanome. L’EPISPOT PS100, base sur les proprietes fonctionnelles de CTCs viables, a une meilleure sensibilite que celle du systeme immunomagnetique de reference (CS) qui ne repose que sur le phenotype des CTCs. Son utilisation pourrait etre proposee dans la detection des CTCs chez les malades atteints de melanome metastatique.