Preparation of doubleantibody and establishment of sandwich ELISA against milk β-casein and soybean β-conglycinin

采用牛奶β-酪蛋白和大豆β-伴球蛋白分别免疫BALB／c小鼠，4次免疫后，通过脾脏细胞杂交瘤技术及间接酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）筛选制备单克隆抗体，同时分别制备兔抗争酪蛋白和β-伴球蛋白多克隆抗体；通过棋盘滴定法，初步确定单克隆抗体和多克隆抗体的最佳工作浓度，建立双抗夹心ELlSA用于乳品掺假以及牛奶、大豆过敏原成分的快速定性检测．结果表明：通过免疫和杂交瘤技术分别获得了抗β-酪蛋白和β-伴球蛋白的单克隆抗体，纯化后2种抗体的效价均达到1：1×10^7，通过免疫兔制备的2种多克隆抗体经纯化后效价在1：2×10^5左右；所建立的双抗夹心ELISA方法的最低检测限为15ng／mL，与其他物种的蛋白不发生交叉反应，具有良好的特异性．这为建立乳品掺假及过敏原成分快速检测奠定了基础．