空肠弯曲菌Pen：19 peblA基因序列分析及其真核表达重组质粒的构建

目的针对空肠弯曲菌基因组序列为一超变量序列,测序比较空肠弯曲菌Pen：2和Pen：19 peblA基因的同源性,以证实peblA基因的保守性.在此基础上,构建空肠弯曲菌Pen：19 peblA基因真核表达重组质粒.方法以含有Kpn Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切位点的同一对引物行PCR反应,获得空肠弯曲菌Pen：2、Pen：8、Pen：19和Pen：21peblA基因DNA片段,测序比较Pen：2和Pen：19 peblA基因的同源性.并选择与格林-巴利综合征最为相关的空肠弯曲菌Pen：19 peblA基因PCR产物为目的片段,插入到真核表达载体pcDNA3.1（＋）,以构建重组质粒.重组质粒经双酶切鉴定、PCR鉴定和测序确认后转染至COS-7细胞,RT-PCR方法检测其瞬时表达.对阳性克隆培养基上清中PEB1蛋白的表达用ELISA分析.结果测序证实空肠弯曲菌Pen：19 peblA基因序列与Pen：2 peblA基因序列一致.采用RT-PCR方法能够从重组质粒转染的COS-7细胞中扩增出与目的基因大小一致的DNA片段.ELISA分析表明PEBl蛋白在COS-7细胞上清中获得表达.结论空肠弯曲菌peblA基因具有良好保守性,以此成功构建的重组质粒能在COS-7细胞中表达,为空肠弯曲菌DNA疫苗的研究奠定了良好的基础.