脂质-聚阳离子-CDKN1B质粒复合物的构建、特性和转染

目的研究开发一种能有效转染 CDKN1B基因进入肺和肝癌细胞的非病毒基因传递系统.方法重组构建了含有 CDKN1B序列和EYFP报告基因的质粒.该重组DNA与鱼精蛋白缩合后再与脂质体作用形成脂质-聚阳离子-DNA复合物(lipids-polycation-DNA-complex, LPDs),分别用激光粒度仪法和透射电镜法研究该LPDs的理化性质;用该LPDs转染几种肺癌、肝癌细胞;该LPDs中的EYFP在A549 细胞中的表达情况用荧光显微镜和流式细胞仪观察和评价;在LLC肺癌细胞、Chang正常肝细胞和7721肝癌细胞中表达的CDKN1B蛋白用Western印迹方法分析.结果该LPDs为凹陷的球状;平均粒径是167 nm,多分散指数为0.35;平均zeta电位为+32.6 mV;从A549细胞的荧光显微照片可清楚观察到EYFP的表达;A549细胞的流式细胞仪分析结果显示,LPDs的转染效率与阳性对照LipofectAMINE(R) 的转染效率相当;Western印迹法分析显示,以LPDs装载的 CDKN1B质粒在LLC细胞、常细胞和7721细胞中表达CDKN1B蛋白,而裸 CDKN1B质粒没有表达.结论脂质-聚阳离子- CDKN1B质粒复合物的构建是成功的.LPDs能够将 CDKN1B质粒传递到肺癌细胞和肝癌细胞,并获得高效率的表达.因此,这种基因传递系统有望开发用作肺癌和肝癌的基因治疗传递系统.