猪IGF—I mRNA实时荧光定量PCR定量标准的构建

采用RT—PCR的方法利用肝组织提取的总RNA制备猪胰岛索样生长因子Ⅰ（plGF—Ⅰ）cDNA目的片断，与pMD-18T vector连接成重组质粒，并转化Escherichia coli DH5α。联合应用PCR鉴定、α互补法、限制性酶切和序列分析法鉴定其特异性。测定纯化的重组质粒A260，确定浓度并以此制备实时荧光定量PCR（FQ—PCR）梯度浓度参考标准。结果表明：pIGF—Ⅰ cDNA目的片断成功制备，并获得稳定的重组质粒，保持了目的片断序列的特异性和完整性，成功构建了pIGF—Ⅰ实时FQ—PCR的定量参考标准。