Intérêt et limite de la fluorescence moléculaire dans le cadre du diagnostic biologique de la maladie de Fabry et de la détection supramoléculaire des lipides

La maladie de Fabry (MF) est une maladie genetique liee a l' X. Elle se caracterise par une accumulation de glycosphingolipides dans le lysosome a la suite d'une mutation du gene GLA codant pour l'α-galactosidase A. Ce travail est structure autour de cette maladie et des problematiques liees a son diagnostic biologique, c'est a dire la mesure d'une activite enzymatique residuelle et la detection des substrats lipidiques accumules. Le lien entre ces deux aspects complementaires est le developpement d'un outil bio-analytique commun: la fluorescence moleculaire. La premiere partie est orientee vers l'optimisation de la mesure de l'activite enzymatique de l'α-galactosidase A avec un papier filtre comme support de prelevement. Ces travaux aboutissent a la mise en place d'une technique de depistage adaptee a des etudes cliniques de grande envergure, dont de profondes modifications analytiques par rapport a la technique de reference, sont a l'origine d'un gain de specificite et donc de fiabilite diagnostic. La seconde partie est orientee vers le dosage potentiel des substrats d'accumulation par une nouvelle technique de detection des lipides par des sondes de fluorescence couplee a la chromatographie liquide. Cette partie fait l'objet de developpements fondamentaux concernant l'optimisation chromatographique, puis une etude mechanistique des associations sondes-lipides est proposee, approche essentielle a la maitrise de la detection des substrats de la MF. Il se degage de ces reflexions analytiques, une proposition de prise en charge nouvelle de la maladie integrant l'apport potentiel de nos travaux dans le depistage, le diagnostic et le suivi therapeutique des patients.