Estudio de los mecanismos intracelulares de la vasorelajacion del musculo liso de aorta de rata

Las grandes diferencias en la incidencia de enfermedades cardiovasculares, tales como la hipertension o la enfermedad coronaria, entre hombres y mujeres postmenopausicas comparada con mujeres en periodo fertil, han sugerido la existencia de diferencias de genero en la funcion vascular. Numerosos estudios han demostrado que los estrogenos tienen un efecto genomico y no genomico sobre el endotelio y la musculatura lisa vascular, dando a estas hormonas un efecto protector frente a numerosas enfermedades, pero todavia quedan muchas cuestiones sin resolver sobre la accion de los estrogenos en el musculo liso; de hecho algunas veces este estudio es imposible por falta de conocimientos basicos sobre el mecanismo de la vasorelajacion. Para ello se plantearon los siguientes objetivos: 1° Estudiar las proteinas transportadoras de cloro y de los canales de cloro en la vasorelajacion del musculo liso de aorta de rata. 2° Examinar el papel del calcio y del potencial de membrana en la relajacion inducida por sustancias estrogenicas en el musculo liso de aorta de rata. 3° Analizar las vias intracelulares de regulacion sobre las que actuan las sustancias estrogenicas, especialmente AMPc-PKA y GMPc-PKG, comparando la actividad de los agonistas estrogenicos alfa y beta en la musculatura lisa vascular. 4° Averiguar el papel de los canales de cloro y canales de potasio en la vasorelajacion inducida por agonistas estrogenicos alfa y beta sobre el musculo liso de aorta de rata. En esta tesis usasmos dos tecnicas; la tecnica "in vitro" de bano de organos, con la cual medimos la respuesta vasorelajante de diferentes sustancias sobre anillos desnudos de rata precontraidos con fenilefrina. Y la citometria de flujo, con la cual medimos dos parametros, el potencial de membrana y el calcio intracelular. Para estudiar el objetivo uno, estudiamos dos sustancias vasorelajantes, el nitroprusiato de sodio y la genisteina. Estos resultados han sido publicados 'en dos articulos, los cuales se recogen en esta tesis. Concluyendo que las proteinas transportadoras de cloro tienen un importante papel en la vasorelajacion inducida por nitroprusiato de sodio. Asi, los inhibidores de los canales de cloro aumentan la vasorelajacion significativamente en mas de un 25%. Y que la vasorelajacion ejercida por la genisteina en aorta de rata sin endotelio fue antagonizada por inhibidores del CFTR y de la PKA, sugiriendo que la apertura del CFTR y la fosforilacion del CFTR por el AMPc estan envueltos en el mecanismo de actuacion de la genisteina. La entrada de cloro por el cotransportador NKCC 1 es requerido para la actividad del CFTR y la vasorelajacion inducida por la genisteina. Estudiamos el papel de los diferentes agonistas estrogenicos sobre el potencial de membrana y el papel del calcio intracelular. Para ello las celulas eran incubadas con fenilefrina, sustancia que producia una despolarizacion y un incremento en el calcio intracelular. A continuacion anadiamos las sustancias a estudiar, observando como producen una rapida hiperpolarizacion en la membrana y una disminucion del calcio intracelular. Analizamos el papel de dos mensajeros intracelulares, el AMPc y GMPc, usando inhibidores para la PKA y la PKG, sobre el efecto vasorelajante de los agonistas estrogenicos. Observando diferencias que nos hacen pensar en dos vias de actuacion distintas, una para los agonistas estrogenicos alfa, que actuarian a traves de la via del GMPc y otra para los agonistas estrogenicos beta, que actuarian a traves del AMPc. De todos los canales de la celula muscular lisas, los mas influyentes en el potencial de membrana son los canales de potasio, por ello estudiamos su efecto en el mecanismo vasorelajante de los aognistas estrogenicos usando inhibidores de estos canales. Cocluyendo que la hiperpolarizacion y vasorelajacion inducida por el DPN (agonista del receptor estrogenicos beta) es debida a una compleja via de senales que envuelven al menos 4 canales de potasio (BKCa, MR, KATP y KV) y el canal de cloruro CFTR. Mientras que los efectos celulares de la vasorelajacion inducida por agonistas alfa, PPT, envuelve los canales de potasio BKCa, IKCa, KIR y KV. EL bloqueo del BKCa en la vasorelajacion inducida por el PPT consigue disminuir la relajacion aproximadamente el doble que en la relajacion inducida por el DPN. En resumen se puede decir que los agonistas estrogenicos alfa y beta utilizan diferentes segundos mensajeros y canales para hiperpolarizar la celula muscular lisa como paso previo a la vasorelajacion