Structure et fonctions de la protéine kinase OST1 dans la cellule de garde d'Arabidopsis thaliana

La secheresse est un stress majeur pour les plantes qui ont developpe de nombreuses strategies pour y faire face. La reponse la plus rapide a un stress hydrique est la fermeture des pores stomatiques qui limite les pertes d'eau par evapo-transpiration. La phytohormone acide abscissique (ABA) participe a cette reponse en modifiant la turgescence des cellules de garde. La proteine kinase OST1 d'Arabidopsis thaliana controle les etapes precoces de la transduction du signal ABA dans ces cellules. Au cours de cette these, nous avons cherche a comprendre les mecanismes de regulation de la kinase OST1. Nous avons d'abord montre que la proteine 10xHis-OST1 produite chez E.coli est active et s'autophosphoryle. Ceci nous a permis d'identifier des residus phosphoryles, cibles potentielles de kinases ou phosphatases regulant l'activite de OST1 dans la plante. L'importance de ces residus a d'abord ete etudiee in vitro par l'analyse de l'activite de proteines recombinantes mutees sur les residus phosphoryles. Puis nous avons etudie l'impact de ces mutations dans la plante en realisant des tests de complementation du mutant ost1 et des tests d'activite kinase apres immunoprecipitation des differentes versions de la proteine OST1. La meme strategie appliquee a l'etude de versions tronquees de OST1 nous a permis d'analyser son domaine C-terminal. Nous avons ainsi identifie plusieurs elements structuraux critiques pour l'activite de OST1 et sa fonction dans la plante. Enfin, notre analyse des differents alleles mutants ost1 suggere que OST1 regule les flux transpiratoires en reponse a un stress hydrique a deux niveaux distincts, dans les cellules de garde et les tissus vasculaires.