Localization of An Exogenous GH Gene on Chromosomes of Transgenic Pig by in situ Hybridizaiton

近些年来随着原位杂交技术的不断改进，该技术已广泛用于染色体的基因定位。非放射性标记探针的应用使基因定位变得更加简单易行，从而有可能对动物的转基因进行定位研究。本文首次采用胶体金标记药盒（Ａｎｔｉｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎｇｏｌｄ）和银加强试剂（Ｓｉｌｖｅｒｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔｒｅａｇｅｎｔｓ）的非同位素原位杂交技术对转基因猪外源基因进行了定位研究。如Ｆｉｇ．１所示：表达质粒ｐＳＭＴＰＧＨ含有载体ｐＵＣ１９，羊启动子ＭＴ０１１和猪生长激素ＰＧＨ基因。选５头带有ｐＳＭＴＰＧＨ的转基因猪，分别制备含有染色体ＤＮＡ的杂交膜。用ＢｇｌＩＩ和ＳｍａＩ对ｐＳＭＴＰＧＨ进行完全酶切，收集０．９Ｋｂ片段作为探针，以ｄｉｇ１１ｄＵＴＰ进行标记。探针与ＤＮＡ杂交后，用Ａｎｔｉｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎｇｏｌｄ和Ｓｉｌｖｅｒｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔｒｅａｇｅｎｔｓ进行显色反应。胰酶法Ｇ—显带后，用光学显微镜检查。选择分散相良好、显影银颗粒清楚的玻片进行摄影记录（Ｆｉｇ．２）。对染色体上的显影银颗粒进行统计分析，参照家猪的染色体标准带型，确定外源ＰＧＨ基因整合位点。Ｆｉｇ．３为４１０４号转基因猪染色体上的银颗粒分布情况。对５头?