Single cell analysis of some deletion in dystrophin gene exons and gender determination by 3-plex nested PCR

目的 通过建立三重巢式PCR技术检测单个淋巴细胞的dystrophin基因和Y性别决定区(sex-determining region Y, SRY)基因,探讨该技术对有家族史的缺失型Duchenne肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy,DMD)家系中肯定携带者进行植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis,PGD)临床应用的可行性.方法在倒置显微镜下分别获取一名正常男性和一名正常女性的50个单个淋巴细胞,用三重巢式PCR技术检测两组dystrophin基因和SRY基因:外显子51/外显子19/SRY,外显子48/外显子19/SRY.结果在外显子51/外显子19/SRY三重PCR反应体系中, 正常男性第51、19外显子及SRY的扩增率分别为96%、94%和94%,正常女性第51、19外显子扩增率分别为94%、94%;正常男女性假阳性率均为6.7%,假阴性率均为0;在外显子48/外显子19/SRY三重PCR反应体系中,正常男性第48、19外显子及SRY扩增率分别达92%、90%和94%,假阳性率和假阴性率均为0;正常女性第48、19外显子扩增率分别达94%和92%,假阳性率和假阴性率分别为6.7%和0.结论建立的三重巢式PCR技术具有较高的敏感性,可望在有家族史的缺失型DMD家系中进行PGD临床应用。