Construction of delta N p63 specific small hairpin RNA expressing plasmid and its inhibitory effects on ΔNp63 mRNA

目的 构建△Np63特异性短发卡RNA(shRNA)表达质粒,检测△Np63-shRNA对膀胱移行细胞癌(TCCB)细胞株5637中△Np63信使RNA(mRNA)表达的抑制作用.方法 设计合成△Np63 shRNA短链寡核苷酸,克隆到Pgenesil-1质粒载体中,构建△Np63特异shRNA表达质粒,在转染试剂介导下转染5637细胞,6孔板每孔加入0.4μg质粒.半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测△Np63 mRNA表达水平.结果 经PstI+SalI双酶切及测序鉴定△Np63-shRNA表达质粒构建成功.在受转染的5637细胞内△Np63-shRNA干预组△Np63 mRNA水平明显低于control组与PBS组(P＜0.05),与control组和PBS组比较抑制率分别为57.3%和63.0%.结论 △Np63特异性shRNA在5637细胞中对△Np63 mRNA表达显示出很好的抑制作用。