节瓜 ISSR-PCR 反应体系优化及引物筛选

为了探索适用于节瓜 ISSR-PCR 反应的反应体系以及得到适用于该体系的 ISSR 引物，首先利用正交实验的方法对节瓜 ISSR-PCR 反应体系的三因素 ( 模板 , 2 伊 san Taq PCR mix 预混液 , 引物 ) 的工作浓度进行优化。然后依据 Tm 值的差异将引物分成了三组，每组分别设定不同的退火温度，以节瓜基因组 DNA 为模板进行 PCR 扩增，经 2% 琼脂糖凝胶电泳和 UVP 成像，结果表明，第二组引物扩增条带的数目、清晰度明显优于第一组和第三组的引物扩增的条带，第二组 45 ℃ 退火条件下的扩增情况明显优于在 40 ℃ 退火条件下的扩增。因此，通过实验与分析，确定了节瓜 ISSR-PCR 反应体系是 DNA 模板 (50 ng /滋 L) 2 滋 L 、 2 伊 san Taq PCR mix 预混液 10 滋 L 、引物 (10 滋 mol / L) 1 滋 L ，筛选到了 18 条适合在节瓜的 ISSR-PCR 反应中应用的引物，其最适合的退火温度是 45 ℃ 。