Determinação Da Concentração De Caseína Em Diferentes Amostras De Leite Através Do Método De Biureto

Ao longo dos anos diferentes metodos espectrofotometricos vem sendo utilizados para a determinacao de proteinas totais. O metodo de biureto e recomendado pela Associacao Americana de Analises Clinicas para a determinacao de proteinas totais no leite e recebe esse nome pela estrutura que se origina da decomposicao da ureia, quando esta e submetida a um temperatura de 180°C. O biureto ao reagir com ions de Cobre em meio alcalino resulta em uma solucao de coloracao violeta, indicando presenca de proteina. No leite existem varias proteinas, sendo a principal delas a caseina, que apresenta alta qualidade nutricional e e utilizada na fabricacao dos derivados do leite. Esta proteina nao e facilmente alterada pelo calor, permanecendo bastante estavel durante o processo de pasteurizacao do leite. Entretanto, quando ocorrem mudancas na acidez, ha rompimento da estrutura das micelas, ocorrendo a precipitacao da caseina e formacao de coagulos. O objetivo do trabalho foi verificar a eficiencia do metodo do biureto na quantificacao da caseina presente em diferentes amostras de leite de vaca. Utilizaram-se 18 amostras de diferentes animais de propriedades leiteiras do municipio de Dom Pedrito. Para a dosagem de proteinas totais foram utilizados 100 µL das amostras de leite + 990 µL de agua destilada. Apos a dosagem de proteinas totais, foi realizada a precipitacao acida da caseina nas amostras, da seguinte maneira: : 10 mL de leite + 10mL de agua destilada + 2mL de acido cloridrico a 2%, submetendo estas amostras ao processo de centrifugacao durante 5 minutos a 2000rpm. Foi adicionado reagente de Biureto a todas as amostras.As amostras permaneceram em descanso durante 30 minutos e em seguida foram submetidas a leitura no espectrofotometro, com a banda de absorcao de 540nm previamente regulada, para analise de proteina total e nao caseinada , respectivamente. Construiu-se uma curva utilizando solucao padrao de caseina (5mg/mL) e, a partir desta, foram testadas diferentes diluicoes: 1,25 mg/mL; 1,87mg/mL; 2,5mg/mL e 3,125 mg/mL. Com os valores de leituras obtidos foi construido um grafico, a partir da qual os valores obtidos de absorbância foram relacionados com a porcentagem de proteina em cada amostra analisada; sendo a menor concentracao de caseina encontrada na amostra 1 (51,29%) e a maior na amostra 11 (76,40%). O valor de proteina total no leite de vaca e cerca de 3%, e destes 80% sao as caseinas. As amostras analisadas apresentaram teores mais elevados de proteinas e menores de caseina do que os valores de referencia, provavelmente devido a interferencia de outros compostos, como por exemplo, a gordura e ao fato da possivel precipitacao apenas parcial da caseina, ja que o acido cloridrico foi utilizado em concentracao baixa. Desta forma sao necessarios novos estudos para a padronizacao da tecnica, com a utilizacao de detergentes para emulsificar a gordura e melhorias na precipitacao acida da caseina.