Validation of selected molecular methods for the mutations determination in codons 12 and 13 of K-RAS gene in five Polish oncological research centers

Chorzy na raka jelita grubego z przerzutami mogą osiągnąc korzyśc z leczenia panitumumabem jedynie, jeśli w guzie nie stwierdzono mutacji w genie K-RAS. W związku z tym konieczne jest zbadanie statusu tego genu w celu wylonienia chorych, ktorzy mogą byc poddani takiemu leczeniu. Celem pracy bylo opracowanie standardowej procedury oznaczania statusu genu K-RAS w materiale izolowanym z bloczkow parafinowych. Kolejnym celem byla walidacja wybranych technik molekularnych oznaczania mutacji w pieciu ośrodkach w Polsce, w ktorych odbywa sie leczenie chorych na raka jelita grubego. Ocenie poddano cztery rozne techniki oznaczania mutacji: SSCP, DHPLC, RFLP/PCR i bezpośrednie sekwencjonowanie. Stwierdzono, ze wszystkie jednostki uczestniczące w procesie walidacji są odpowiednio przygotowane do podjecia dzialalności diagnostycznej w zakresie oznaczania statusu genu K-RAS. Przyjeto nastepujące zalecenia dla laboratoriow diagnostycznych: 1. Material do izolacji DNA powinien zawierac przynajmniej 70% utkania nowotworowego; 2. Ujednolicenie procedury izolacji DNA ze skrawkow parafinowych wymaga stosowania gotowego zestawu do izolacji DNA; 3. W przypadku braku jednoznacznego wyniku konieczne jest stosowanie dwoch metod oznaczania mutacji, przy czym jedną z nich powinno byc sekwencjonowanie bezpośrednie.