胞外HMGB1调控SDF-1/CXCR-4轴介导脐血CD34＋细胞的迁移作用研究

本研究探究高迁移率族蛋白B1 （high mobility group boxl,HMGBl）和/或基质细胞衍化因子（SDF-1）对脐血CD34＋细胞的迁移作用,并进一步探讨HMGB1是否通过调控SDF-1/CXCR-4轴介导脐血CD34＋细胞的迁移.分离脐血单个核细胞,应用免疫磁珠分选CD34＋细胞,流式细胞仪检测脐血CD34＋细胞的纯度.利用趋化迁移实验（Transwell）测定HMGB1和/或SDF-1对脐血CD34＋细胞的迁移作用.1.0×105细胞/孔脐血CD34＋细胞加入上孔中,应用不同浓度梯度的HMGB1和/或SDF-1（0、10、25、50、100、200 ng/ml）检测HMGB1和/或SDF-1促进脐血CD34＋细胞迁移的最适作用浓度.新鲜分离的脐血CD34＋细胞表达SDF-1受体CXCR4和HMGB1受体TLR2TLR4和RAGE.为进一步探讨何种受体在HMGB1和SDF-1介导的细胞迁移中起作用,应用抗SDF-1抗体,抗CX-CR-4抗体,抗RAGE抗体,抗TLR2抗体和抗TLR4抗体阻断研究HMGB1和/或SDF-1对脐血CD34＋细胞的迁移作用.结果表明,磁珠分选脐血CD34＋细胞纯度为97.40±1.26％.25 ng/ml的SDF-1不能介导脐血CD34＋细胞的迁移,最佳作用浓度为100 ng/ml.HMGB1的最低作用浓度为100 ng/ml.通过剂量研究实验发现,细胞迁移最佳联合作用浓度为HMGB1 100 ng/ml＋ SDF-1 50 ng/ml.抗体阻断实验结果表明,抗SDF-1（4μg/ml）和抗CXCR-4（5 μg/ml）抗体均可以阻断HMGB1单独或联合SDF-1介导的细胞迁移运动,而抗RAGE抗体,抗TLR2抗体及抗TLR4抗体并不能阻断HMGB1和/或SDF-1对脐血CD34＋细胞的迁移作用.结论：HMGB1和SDF-1均可以促进脐血CD34＋细胞的迁移,HMGB1可能通过CXCR-4而非RAGE和TLR受体加强SDF-1诱导的细胞迁移作用.具体的作用机制还需进一步探讨.