CD40配体-受体载体介导的CpG ODN靶向脐血B淋巴细胞的特异传递及其免疫效应

背景：CpG寡核苷酸是一种高效低毒的免疫佐剂，在许多疾病的基因治疗中具有广阔的应用价值，但存在种属和细胞特异性，细胞摄取率低，易被酶降解，成为临床应用的障碍。 目的：拟验证CpG寡核苷酸通过CD40配体受体载体系统对脐血B淋巴细胞特异靶向传递及其免疫效应的增强作用。 设计、时间及地点：观察对比实验，于2004-04／2007-10在广州暨南大学附属第一医院血液科、儿科完成。 材料：取健康新生儿的肝素抗凝新鲜脐血，事先征得父母知情同意并获医院伦理委员会审核批准。 方法：制备CD40配体碳二亚胺-多聚左旋赖氨酸-CpG寡核苷酸交联复合物，与脐血单个核细胞共培养。分别于24，48，72，96h应用流式细胞仪检测单个核细胞对FAM标记CpG寡核苷酸的摄取率及平均摄入强度；培养96b后用直接免疫荧光标记法标记CD19，CD20，CD22单抗，以流式细胞仪检测阳性表达率；细胞悬液加入96孔板，3组分别加入CD40配体-碳二亚胺-多聚左旋赖氨酸-CpG寡核苷酸、单纯CpG寡核苷酸及ddH20，培养92h，以四甲基偶氮唑盐比色法测细胞增殖能力；以酶联免疫吸附法测以上3组细胞培养上清IgG水平。 主要观察指标：单个核细胞对CpG寡核苷酸的摄取率及平均摄入强度，淋巴细胞亚群的表达，细胞增殖能力，培养上清IgG水平。 结果：与单纯CpG寡核苷酸未交联组相比，单个核细胞对交联复合物摄取率更高（〉98％），达摄取峰值时间更早。共培养后CD19^＋，CD22^＋，CD20^＋细胞表达升高，细胞增殖量及上清IgG水平均高于对照组（P〈O．05）。 结论：CD40配体一受体载体系统有助于CpG寡核苷酸特异高效的B细胞靶向投递，并增强其免疫效应。