Lysophosphatidylcholine의 혈관평활근세포에 대한 세포 독성

연구목적: 혈관평활근세포에 대한 lysophosphatidylcholine (lysoPC)의 세포 독성 효과를 조사하였다. 연구재료 및 방법: 쥐의 대동맥으로부터 혈관평활근세포를 얻어 배양한 후 lysoPC에 의해 세포사가 유도되는지의 여부를 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide (MTT)와 lactic dehydrogenase (LDH) 측정 및 DNA 사다리 발현 양상 비교를 이용하여 관찰하였다. 세포자멸사의 변화를 propidium iodide (PI) 염색 및 FACS를 이용하여 조사하였고, 2’, 7’-dichlorofluorescin diacetate (DCF-DA)를 이용하여 세포내 reactive oxygen species (ROS) 생성을 측정하였다. 또한 caspase, bcl-2 및 bax의 발현을 western blot 분석으로 측정하였다. 결과: MTT 측정 결과 25 μM 이상 농도의 lysoPC 처리 후 10시간이 경과하였을 때 50% 이상의 혈관평활근세포가 죽는 것이 관찰되었으며, LDH 수치는 변화가 없었다. 반면, DNA 사다리 양상 관찰 결과 세포자멸사에 특징적인 양상이 확인되었다. 항산화제인 비타민 E와 NF-kB 억제제인 caffeic acid phenylethyl ester (CAPE) 투여는 모두 lysoPC에 의한 세포자멸사를 억제하였다. Western blot 분석 결과 lysoPC 처리시 caspase-3 및 -8의 증가가 관찰되었다. 총 bcl-2 및 bax 단백 발현에는 변화가 없었으나, bax의 세포질에서 미토콘드리아 세포막으로의 위치 변화가 관찰되었다. 결론: LysoPC는 혈관평활근세포의 세포자멸사를 유도하며, 산화 기전 및 nuclear factor-kappaB (NF-kB) 경로가 관련되어 있다.