Az Agrobacterium vitis agrocin termelését kódoló DNS szakasz izolálása, jellemzése és a termelt agrocin növénykórtani értékelése = Isolation and characterization of the DNA region of Agrobacterium vitis required for agrocin production and its plant pathological evaluation

Az Agrobacterium vitis agrocin termeleset kodolo DNS szakasz izolalasa, jellemzese es a termelt agrocin novenykortani ertekelese A jelen palyazatban az Agrobacterium vitis altal előidezett szőlő-golyvasodas ellen hasznalt biologiai vedekezesre alkalmas F2/5-os torzs agrocin termelesert felelős DNS szakaszat (38 kb) izolaltuk es ertekeltuk a termelt agrocin novenykortani vonatkozasait. Transzpozon mutansokat allitottunk elő es szekvenaltuk a transzpozon beepulesi helye koruli DNS szakaszokat. A DNS szekvenciakbol probakat keszitettunk es a bakterium genkonyvtaraban genkonyvtarban megtalaltuk azt a genszakaszt amely kodolja az agrocin termeleset. Az izolalt klonok kozul az egyik amely egy 38 kb inszertet tartalmaz kepes volt a mutansok eredeti agrocintermeleset helyreallitani, igazolva, hogy a keresett genek ezen a szakaszon talalhatok. Izolaltuk a termelt agrocint es meghataroztuk molekulasulyat (>1000 kDa). Megallapitottuk, hogy a reszlegesen tiszta agrocinnal szemben a novenykorokozo bakteriumok kozul csak az Agrobacterium vitis torzsek erzekenyek. A szőlőn a reszlegesen tisztitott agrocinnal megakadalyozhato a tumorkepzes. | Isolation, characterization and plant pathological evaluation of the agrocin production of Agrobacterium vitis In this project, we investigated a non-pathogenic Agrobacterium vitis strain F2/5 used again the pathogenic strains of Agrobacterium vitis causing tumors on grapevine. We isolated and cloned a piece of DNA (38 kb) coding genes responsible for agrocin production of Agrobacterium vitis strain F2/5. The produced agrocin was characterized and evaluated from plant pathological aspects. Agrocin-minus mutants were made from the nontumorigenic strain F2/5 and sequenced the EcoRI fragment at the transposon insertion sites. On the bases of these sequences probes were constructed and used for the screening of a genomic library of F2/5. One clone from the library was able to restore the agrocin production in agrocin-minus mutants indicating that the insert in this clone contained the DNA piece responsible for the agrocin production. Biochemical isolation and purification of the agrocin revealed that the agrocin is a large protein molecule (M.W. >1000 kDa). It is heat and proteolitic enzymes sensitive. The partially purified agrocin was able to inhibit the tumor formation on grapevine.