Assessment of Appropriate L-cysteine Concentration for Boar Semen Cryopreservation by Using Flow Cytometry

บทคดยอ การศกษานมวตถประสงคเพอตรวจหาความเขมขนทเหมาะสมของแอลซสเตอนเตมลงในสารละลายเจอจางนำเชอ lactose-egg yolk (LEY) เพอปรบปรงคณภาพของนำเชอสกรพอพนธภายหลงการแชแขงและทำละลายโดยใชวธยอม Annexin-V/PI รวมกบโฟลวไซโตเม เตอร นำเชอสดจากสกรพอพนธจำนวน 12 ตวผานกระบวนการโดยใชสารละลายเจอจางนำเชอ LEY และเตมแอลซสเตอนทความเขมขน 0 5 10 และ 15 มลลโมลาร นำเชอตวอยางนำไปผานการแชแขงและทำละลายกอนนำไปศกษา ลกษณะผวของเยอหมเซลลอสจศกษาดวย กลองจลทรรศนอเลกตรอนแบบสองกราด (SEM) ขณะทความสมบรณของเยอหมเซลลอสจศกษาดวยวธยอม Annexin-V/PI ผลจากกลอง SEM พบความเสยหายแบบตางๆ เกดขนกบผวของเยอหมเซลลอสจในทกความเขมขน ขณะทยงพบเซลลอสจทมเยอหมเซลลสมบรณ กระจายอย เมอศกษาดวยการยอม Annexin-V/PI พบวา เซลลอสจทมเยอหมสมบรณซงมชวตและไมมการเสอมตาย (AN-/PI-) เพมขน (p< 0.05) ทความเขมขน 5 และ 10 มลลโมลาร การศกษานบงชวา ความเสยหายของเยอหมเซลลอสจสามารถพบไดในนำเชอทผานการแชแขง และทำละลาย นอกจากน พบวาแอลซสเตอนทความเขมขน 5 และ 10 มลลโมลารใน LEY เปนความเขมขนทเหมาะสม มผลตอตานภาวะ oxidative stress ซงชวยใหนำเชอสกรพอพนธแชแขงมคณภาพดขน คำสำคญ : การแชแขง, แอลซสเตอน, สกร, สารละลายเจอจางนำเชอ, เซลลอสจ Abstract The present study aims to investigate a suitable L-cysteine level to be added the lactose-egg yolk (LEY) extender to improve the quality of boar semen after freezing-thawing using Annexin-V and propidium iodide (PI) assay detected with flow cytometer. Ejaculates from twelve boars were processed in the LEY extender and added with 0, 5, 10 and 15 mM of L-cysteine. Semen suspensions were cryopreserved with a controlled-rate freezer and thawed for examination. The surface of sperm plasma membrane was explored by scanning electron microscopy (SEM) while sperm membrane integrity was performed by Annexin-V/PI assay. Of all treatments, the damaged spermatozoa in various patterns were observed whereas the intact spermatozoa were still found by SEM. The viable and non-apoptotic (AN-/PI-) sperms were higher (p< 0.05) in the levels of 5 and 10 mM. These results indicated that the damaged spermatozoa were found after freezing/thawing and the L-cysteine at concentrations of 5 to 10 mM added to LEY extender was the optimal dose against oxidative stress and acquisition for improving cryopreserved boar sperm quality. Keywords : freezing, L-cysteine, pig, semen extender, spermatozoa