甘蔗14-3-3基因真核表达载体构建及分析

该实验拟构建甘蔗14-3-3基因的真核表达载体，为体外研究该蛋白功能和高级构象特征奠定基础。用RT—PCR技术从甘蔗茎中扩增出编码14-3-3蛋白的全长基因，并连入pGEM—T载体中，双酶切和测序用于序列正确性的鉴定。结果表明，该基因的最大开放阅读框为771bp，编码6256个氨基酸。后将所得cDNA片段亚克隆至真核表达载体pPIC9K，经电转后在酵母细胞中表达，表达产物经Westernblot鉴定分子量约为28kD。表明已成功构建了甘蔗14—3—3蛋白真核表达载体，并获得了表达产物。