CTP-HBcAg18-27-Tapasin融合蛋白胞内转导功能的检测

目的：观察融合蛋白CTP-HBcAg18-27-Tapasin在抗原提呈细胞内的转导功能。方法：体外分离培养近交系BALB／c小鼠髓源性DC，加入重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素-4培养5d，再加入脂多糖诱导DC成熟。不同剂量的CTP-HBcAg18-27-Tapasin及RP-MI-1640培养液加入细胞培养介质中，激光共聚焦显微镜下观察免疫荧光在细胞内的分布及定位，并对荧光强度进行定量分析，进-步以West-ernblot观察不同组细胞中Tapasin表达的差异来检测CTP-HBcAg18-27-Tapasin的转导效率。结果：成功体外诱导培养并鉴定小鼠骨髓源性树突状细胞，免疫荧光法证实CTP-HBcAg18-27-Tapasin能够穿透树突状细胞膜进入细胞质，而不能进入细胞核，且荧光强度50gg／LCTP-HB-cAgl8-27-Tapasin组依次高于10μg／LCTP-HBcAg18-27-Tapasin组和空白组，Westernblot也证实CTP-HBcAg18-27-Tapasin能够穿透细胞膜进入树突状细胞，结果显示差异有统计学意义。结论：CTP-HBcAg18-27-Tapasin具有穿透树突状细胞膜定位于胞浆的能力。