Influencia del tipo de tratamiento de la pulpa durante el aislamiento en la obtención de células madre de pulpa dental humanas

Objetivo: Estudiar el efecto del tipo de tratamiento de la pulpa durante el aislamiento, con unas condiciones de O2 del 3%, en el tiempo y la eficacia de obtencion de celulas madre de pulpa dental (CMPD). Material y metodo: Se utilizaron 120 pulpas dentales para aislar CMPD tratando el tejido pulpar durante el aislamiento mediante 9 metodos distintos, utilizando agentes digestivos, disgregantes, mecanicos o combinandolos. Las celulas fueron positivas para los marcadores CD133, Oct4, Nestin, Stro-1, CD34 y negativas para el marcador de celulas hematopoyeticas CD45, confirmando de esta manera la presencia de celulas madre mesenquimales. Se analizo la eficacia de obtencion de CMPD y el tiempo minimo necesario para obtener las celulas comparando los 9 metodos. Resultados: Se aislaron CMPD de 97 de las 120 pulpas utilizadas para el estudio, con lo que el porcentaje total de obtencion de CMPD fue del 80,8%. Se obtuvieron CMPD con todos los metodos utilizados menos con fragmentacion mecanica de la pulpa, en el que no se realizo digestion enzimatica de esta. El tiempo minimo para aislar CMPD fue de 8 horas, realizando la digestion con 2mg/ml EDTA durante 10 minutos, 4mg/ml de colagenasa tipo I, 4mg/ml de dispasa tipo II durante 40 minutos, 13ng/ml de termolisina durante 40 minutos y sonicando el cultivo durante un minuto. Conclusion: De una serie de 120 pulpas dentales se aislaron CMPD de 97. Tras comparar 9 tratamientos de la pulpa durante el aislamiento, el tiempo minimo para aislar CMPD fue 8 horas. Al combinar agentes enzimaticos, disgregantes y mecanicos se consiguio acortar al maximo el tiempo de obtencion de CMPD sin comprometer la obtencion de celulas.