Optimisation of Arabidopsis thaliana DNA extraction for the analysis of 8-oxo-7,8-dihydro-2'-deoxyguanosine formation after gamma irradiation

La 8-oxo-7,8-dihydro-2'-desoxyguanosine (8-oxodGuo) est une lesion oxydative majeure de l'ADN. Divers protocoles d'extraction d'ADN vegetal ont ete optimises dans le but de quantifier la 8-oxodGuo dans l'ADN total d'une suspension cellulaire d'Arabidopsis thaliana en utilisant la chromatographie liquide haute performance couplee a un detecteur electrochimique (CLHP-EC). Nos resultats montrent que l'ADN peut etre oxyde artefactuellement au cours de son extraction. L'utilisation de chelateurs de metaux permet de reduire le niveau de base de 8-oxodGuo a 3,3 ± 0,1 8-oxodGuo/10 5 Gua et d'augmenter la reproductibilite des experiences. L'etude des effets des rayons γ sur les cellules de plantes a mis en evidence que l'oxydation de la guanine de l'ADN est tres faible in vivo (formation de 15 8-oxodGuo/10 9 Gua par Gy).