双色流式细胞术在检测特定亚群淋巴细胞Ca^2＋变化中的应用

目的: 建立检测特定亚群淋巴细胞内钙离子的方法. 方法: 以PHA刺激96h的PBMC作为研究对象,在以quantum-red标记的抗膜表面抗原CD8进行膜表面染色的同时,进行Fluo-3/AM负载及细胞内Ca2+的检测,摸索以双色流式细胞术检测特定亚群淋巴细胞内Ca2+变化的最佳条件. 并检测经钙离子载体A23187和趋化性细胞因子刺激后,PHA活化的PBMC中CD8+细胞内的Ca2+变化. 结果: ①选择1 μmol/L作为Fluo-3/AM负载的最佳浓度;②与Fluo-3/AM负载相适应的改良染色条件不影响膜表面荧光染色的阳性率和平均荧光强度;③趋化性细胞因子刺激后,CD8+细胞内Ca2+浓度有一定水平上调,但远不如A23187的作用明显. 结论: 建立了以双色流式细胞术鉴定特定亚群淋巴细胞内钙离子变化的方法,可广泛用于不同淋巴细胞亚群钙离子的快速精确测量.