Comparação de diferentes métodos de incorporação de DNA exógeno pelo espermatozoide bovino

Apesar da manipulacao genetica de animais domesticos ser de grande interesse para a producao animal e para a industria farmaceutica, a sua eficiencia ainda e insatisfatoria. A injecao pronuclear, a tecnica mais utilizada para tal proposito, principalmente em camundongos, ainda apresenta limitacoes para esta especie. Algumas alternativas tem sido desenvolvidas como o uso de espermatozoides como vetores para transferencia genica, na qual a celula espermatica tem habilidade espontânea de se ligar a molecula de DNA e internaliza-la. Dado o potencial da transferencia genica mediada por espermatozoide para animais domesticos transgenicos, o objetivo do presente trabalho foi a avaliacao de quatro metodos de incorporacao de DNA para a transferencia genica mediada por espermatozoides na especie bovina: incubacao com DNA, alteracao da membrana plasmatica induzida por calcio ionoforo seguida por incubacao com o DNA exogeno, eletroporacao e lipofeccao. Espermatozoides nao expostos ao DNA exogeno foram usados como grupo controle. Os indices de clivagem, blastocisto e eclosao foram avaliados, respectivamente, as 72 horas apos a inseminacao dos oocitos, bem como, aos 9 e 12 dias de cultivo embrionario. Os embrioes positivos para o DNA exogeno foram avaliados por PCR. Nenhum efeito de tratamento foi observado nos indices de clivagem, blastocisto e eclosao. Alem disso, a porcentagem de blastocistos positivos para o DNA exogeno nao diferiu entre os grupos experimentais. Apesar do baixo numero de embrioes positivos para DNA exogeno, os resultados obtidos mostram que todos os tratamentos apresentaram eficiencias similares. A conclusao obtida foi que, apesar de os indices de desenvolvimento embrionario terem sido similares e constante em todos os grupos experimentais, outros fatores como a sequencia, o tamanho e a concentracao do DNA exogeno devem ser avaliados para melhorar a transferencia genica mediada por espermatozoides.