上海地区1株SARS-Cov N基因序列分析及表达

目的通过基因克隆、序列分析以及在大肠埃希菌中的表达和分离纯化,研究上海地区1株SARS-CovN蛋白编码基因变异情况,为SARS-Cov N蛋白应用于检测SARS感染作基础.方法用RT-PCR法从患者血清样品中扩增获取SARS-Cov N蛋白编码基因,并重组于质粒pGEX-2T.双脱氧法双向测定N基因序列,与GenBank公布的89株SARS-Cov N基因序列比对分析;重组N蛋白编码基因在E.coli中表达,亲和层析法分离纯化表达产物.结果RT-PCR扩增获取SARS-Coy N基因1 269 bp,测定的核酸序列与GenBank中公布SARS-Coy N基因序列比对,变异位点数1～4 bp,其中导致1～3个编码氨基酸突变.重组N基因的表达质粒pGEX-2T/SARS-Cov N转化大肠埃希菌JM109,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,N基因在大肠埃希菌中高效表达,经亲和层析,得纯度＞90%的表达产物,表达的融合蛋白分子量为74000 Da.结论上海地区1株SARS-Coy N蛋白编码基因与已公布的89株毒株核酸同源性为99.92%～99.68%,编码氨基酸同源性为99.8%～99.3%;该基因在E.coli中表达,经分离纯化得到高纯度表达产物,为进一步应用于SARS-Cov感染检测打下基础.