Proximity in situ ligation as a method for detecting active Notch in breast cancer cell lines

Brostcancer och Notch-proteiner Var tionde kvinna i Sverige kommer att ha drabbats av brostcancer vid 75 ars alder. Cancerforskningens framsteg under de senaste decennierna har forbattrat diagnostik och behandling av denna sjukdom sa att man nu kan radda majoriteten av brostcancerpatienterna. Emellertid finns det fortfarande former av brostcancer som inte svarar pa de behandlingsmetoder som anvands i kliniken idag. Forhoppningen ar att aven dessa mer motstandskraftiga former av brosttumorer har en akilleshal som tillater oss att doda dessa tumorceller utan att de friska cellerna skadas - det ar har Notch-proteiner kan spela en roll. Notch-proteinerna ingar i ett cellulart signalsystem som har funnits lika lange som de flercelliga organismerna. De ser ungefar likadana ut i bananflugor som i manniskor, och ar ytterst viktiga for att koordinera cellers utveckling, genom att delta i signaleringen som bestammer vilken typ av cell som ska utvecklas till exempelvis lever- eller muskelceller. Det har visats att det finns extra mycket Notch i vissa brosttumorer och att det verkar paga en signalering langs denna signallinje, men vi kan annu inte saga sakert i vilka fall proteinet ar aktivt eller inte. Notch-proteiner sitter pa cellytan som en antenn och nar den mottar signaler fran grannceller, transporteras en del av proteinet in till cellkarnan dar den kan delta i att aktivera andra gener i genomet. Flera andra proteiner kan pa detta satt uttryckas och darmed fundamentalt forandra cellens utveckling. Detta ar normalt i cellernas utveckling, men i cancerceller loper sadana har mekanismer amok. I mitt examensarbete har jag utvecklat en metod som kan anvandas for att visa om Notch proteinerna verkligen ar aktiva eller inte. Genom att anvanda markta antikroppar mot Notch och dess medhjalparprotein i cellkarnan kan vi skilja det aktiva proteinet fran det inaktiva genom fluorescensmikroskopi. Med denna metod amnar vi undersoka graden av aktivitet i odlade cancerceller och sa smaningom aven i tumorvavnad fran patienter. Vi hoppas pa detta satt kunna kartlagga om, hur, nar och i vilka patientgrupper Notch har betydelse sa att vi kan avgora om detta protein ar den akilleshal som kan anvandas for att angripa aven motstandskraftiga former av cancer. Handledare: Sofia Gruvberger Saal Examensarbete for masterexamen i cell- och molekylarbiologi30 hp 2012 Biologiska institutionen, Lunds universitet Onkologisk forskning, BMC, Lunds Universitet