Implementación de un método basado en PCR, para el diagnóstico de Ehrlichia spp., en caninos de Medellín (Colombia).(Implementation of a PCR-based method for the diagnosis of Ehrlichia spp, in canine in Medellin (Colombia)*)

Resumen La Ehrlichiosis es una enfermedad de distribucion mundial, es endemica en los paises tropicales y subtropicalesen donde la seroprevalencia puede llegar a ser hasta del 33%, como en Mexico e Israel. La baja sensibilidad de laspruebas utilizadas para el diagnostico, 67% en las pruebas con IFI, han llevado a la necesidad de buscar nuevas alternativas que permitan diagnosticar la enfermedad de manera rapida y eficaz. La PCR es una de estas tecnicas quepodria ofrecer una alta sensibilidad y especificidad. El objetivo de este trabajo fue implementar la prueba de PCR,para el diagnostico de Ehrlichia spp., en muestras de sangre de caninos sospechosos provenientes de consultoriosveterinarios de la ciudad de Medellin. Se tomaron 90 muestras, 33 de animales sospechosos de ehrlichiosis porsintomatologia, y 57 de animales sanos como probables negativos. Se utilizo como control positivo el ADN de la cepaMadrid. La PCR fue realizada utilizando como ejemplo el protocolo sugerido por Aguirre et al. (2004). Se utilizaronlos primers EEC y ECB reportados por Dawson et al. (1994). En este estudio se logro amplificar la banda de 500 pbcorrespondientes al gen 16s ARNr de Ehrlichia spp., en 11 muestras de los animales sospechosos, obteniendo unafrecuencia de presentacion del 33,3%, confirmando la presencia de la bacteria en los animales de nuestro medio, ylogrando la implementacion de PCR para Ehrlichia spp. como herramienta diagnostica en nuestra ciudad. Abstract Ehrlichiosis is a worldwide illness, endemic in tropical and subtropical countries where seroprevalence can reach upto 33% as it is the case in Mexico and Israel. However, the low sensitivity of the serological tests used for diagnosis,67% in tests with IFI, has led to a required searching for new alternatives to diagnose the disease quickly andeffectively. PCR is one of these techniques that could provide high sensitivity and specificity. The target of this studywas to implement the PCR test for the diagnosis of Ehrlichia spp., on blood samples from animals with suspectedillness from veterinary clinics in the city of Medellin. 90 samples were taken, 33 samples from animals suspectedof having symptoms and 57 from healthy animals as probable negatives. DNA from the Madrid strain was used as apositive control. The PCR was performed using as an example the protocol suggested by Aguirre et al (2004). EECand ECB primers reported by Dawson et al (2004) were used (aqui el propio texto en espanol no esta claro). In thisstudy the 500pb band was amplified, corresponding to the 16s rRNA of Ehrlichia spp., in 11 samples of the animalswith suspected illness, obtaining a presentation rate of 33.3%, confirming the presence of bacteria in the animals ofthe environment, and achieving the implementation of PCR for Ehrlichia spp. as a diagnostic tool in the city. Implementacao de um metodo baseado em PCR, para o diagnostico deEhrlichia spp., em caninos de Medellin (Colombia). Resumo A ehrlichiose e uma doenca em todo o mundo, e endemica em paises tropicais e subtropicais, onde a soroprevalenciapode atingir ate 33%, como no Mexico e Israel. A baixa sensibilidade dos testes utilizados para o diagnostico, 67%nos testes de IFI, levaram a necessidade de buscar novas formas de diagnosticar a doenca de forma rapida e eficaz.PCR e uma tecnica de tal forma que poderia fornecer alta sensibilidade e especificidade. O objetivo deste trabalhofoi implementar o teste de PCR para o diagnostico de Ehrlichia spp., Em amostras de sangue de caes suspeitos declinicas veterinarias da cidade de Medellin. Demorou 90 amostras, 33 amostras de suspeitos que apresentavamsintomas de erliquiose e 57 animais saudaveis como negativo provavel. Foi utilizado como controle positivo deADN a partir da estirpe de Madrid. A PCR foi padronizada utilizando o exemplo do protocolo proposto por Aguiaret al. (2004). Utilizou-se primers BCE CES e relatado por Dawson et al. (1994). Neste estudo foram amplificadosde banda de 500 pb para o gene 16S rRNA do genero Ehrlichia em 11 amostras de animais suspeitos, a obtencao deuma taxa de apresentacao de 33,3%, o que confirma a presenca de bacterias em animais nosso meio ambiente e obtera implementacao de PCR por Ehrlichia spp. como uma ferramenta de diagnostico em nossa cidade.