Purification et caractérisation d'un complexe Rho A/Rho-GDI à partir de cytosol de polynucléaires neutrophiles bovins

Un complexe rho a/rho-gdi a ete purifie a l'homogeneite a partir de cytosol de neutrophiles bovins. Les composants du complexe ont ete caracterises, en ce qui concerne rhoa (24 kda) par sa capacite d'etre adp-ribosyle par l'exoenzyme c3 de clostridium botulinum et rho-gdi (28 kda) par reaction avec un anticorps polyclonal specifique. Le complexe rhoa/rho-gdi, relativement stable, est maintenu sous une forme homogene de pi 5. 0 apres isoelectrofocalisation en gel non denaturant. Par contre en gel denaturant, le complexe est dissocie en ses composants, rho-gdi de pi 5. 0 et rhoa de pi 6. 2. Le complexe rho a/rho-gdi a l'etat natif ne contient que du gdp. A partir d'un ensemble d'experiences portant sur l'effet de la phosphatase alcaline sur le complexe rhoa/rho-gdi, et sur la phosphorylation de rho-gdi in vitro et in vivo, on a conclu que le composant rho-gdi du complexe rhoa/rho-gdi etait phosphoryle. La capacite specifique d'adp-ribosylation par l'exoenzyme c3 du complexe rhoa/rho-gdi dans le cytosol et dans des fractions partiellement purifiees est nettement augmentee par l'addition de faibles quantites de detergents, d'acides gras et de phospholipides, en particulier certains phosphoinositides. Dans le meme temps, l'echange de gdp lie a rhoa contre du gtp, (s) est accelere, ce qui rend plausible l'hypothese d'un controle in vivo par certains phosphoinositides sur le demasquage de rhoa associe a rho-gdi