腺病毒介导的BMP-2基因转染兔骨髓基质干细胞及对其增殖、成骨分化的影响

目的：用骨形态发生蛋白-2（BMP-2）腺病毒表达载体（Ad—BMP-2）转染兔骨髓基质干细胞（BMSCs），研究转染对其增殖、成骨分化的影响。方法：用Ad—BMP-2转染兔BMSCs，利用免疫细胞化学法、原位杂交染色和蛋白印迹法检测转染后细胞BMP-2的表达。流式细胞仪观察细胞周期的变化，分析转染对BMSCs增殖的影响。酶标法检测ALP活性；免疫荧光检测骨钙素（OCN）、Ⅰ型胶原表达，分析转染对BMSCs成骨分化的影响。结果：BMP-2基因在转染细胞内mRNA水平和蛋白水平均有较高表达，蛋白印迹法检测到培养液中有BMP-2蛋白阳性表达。流式细胞仪检测G1期、S期细胞比例与空白对照组无差异。ALP活性明显增高，骨钙素、Ⅰ型胶原免疫荧光检测，见胞浆内有大量显绿色荧光的阳性物质。结论：在腺病毒载体介导下BMP-2基因成功导入BMSCs，细胞增殖未因转染而受影响，并可持续表达基因产物，向成骨细胞分化。