Etablierung eines parallelen immunologischen Nachweises von Drogen in Serum

Innerhalb dieser Arbeit wurde ein kompetitiver ELISA etabliert und validiert, der eine Quantifizierung von Drogen im humanen Serum gemas geltender Richtlinien ermoglicht. Der Nachweis erzielte zudem vergleichbare Ergebnisse zur Referenzmethode (Massenspektrometrie). Es wurden neun Drogen (Amphetamin, Methamphetamin, Methylenedioxymethamphetamin (MDMA), Tetrahydrocannabinol (THC), Phencyclidin (PCP), Methadon, Morphin, Kokain und Benzoylecgonin) und insgesamt 33 Antikorper verwendet. Alle Reagenzien durchliefen zunachst ein stringentes Validierungsverfahren. Nach Ausschluss moglicher Kreuzreaktivitaten konnten fur drei Drogen (Methadon, MDMA und Benzoylecgonin) jeweils ein Antikorper bestimmt werden, der eine spezifische und sensitive Quantifizierung der Droge ermoglichte. Mit dem anti-MDMA Antikorper war zusatzlich der Nachweis in einem miniaturisierten Format (Microarray) moglich. Die verwendeten Antikorper zeigten keine Kreuzreaktivitaten mit anderen Drogen, Antikorpern, dem Probenmaterial oder anderen Versuchskomponenten. Weiterhin wurde kein Einfluss etwaiger Abbauprodukte im langfristig gelagerten Serum beobachtet. Durch die Ergebnisse wird gezeigt, dass ein immunologischer Nachweis von Drogenmissbrauch in Serum eine verlassliche Erganzung zu bestehenden Methoden darstellt. Bei einer Ubertragung des immunologischen Ansatzes auf ein Microarray ergibt sich zudem die Moglichkeit mehrere Drogen und Serumproben parallel nachzuweisen bzw. zu vermessen. Der hohere Probendurchsatz, der kompakte Versuchsaufbau und der geringere Verbrauch an Material gehort zu den grosten Vorteilen dieser Technik.%%%%A competitive ELISA was established, which enables a reliable quantification of serological drug samples according to current guidelines. The method achieved comparable results to the standard method mass spectrometry. In total nine drugs (amphetamine, methamphetamine, 3,4-methylenedioxy-methamphetamine (MDMA), tetrahydrocannabinol (THC), phencyclidine (PCP), methadone, morphine, cocaine and benzoylecgonine) and 33 antibodies were tested. All reagents had to pass through a stringent validation process. After exclusion of cross-reactivities antibodies against three drugs (methadone, MDMA, benzoylecgonine) were validated, which allowed a specific and sensitive quantification. Additionally, by using the anti-MDMA antibody a detection of MDMA in serum on microarray (miniaturized format) was achieved. No cross-reactivities were detected for the used antibodies with other drugs, antibodies, sample material or other assay components. Furthermore, no influence of degradation products in long-stored serum was recorded. The results prove, that immunoassays can be a reliable complement to existing methods. By adapting the immunological method to a microarray, the simultaneous quantification of various drugs and serum samples is enabled. The increased through-put, smaller footprint and the decreased consumption of reagents are some of the biggest advantages of this technique.