Antibiotic Susceptibility of Escherichia Coli in LB Broth and Blood Determined by Real-time Quantitative PCR

目的 建立以实时定量PCR快速检测大肠埃希菌在LB液体培养基和健康人全血中对抗生素药物敏感性的方法.方法 临床血培养获得大肠埃希菌株,以常规纸片法检测其对抗生素的药物敏感性.分别在LB液体培养基和健康人新鲜全血中加入该大肠埃希菌至终浓度为0.5麦氏单位,采用不加抗生素的标本作为生长对照组,加入耐受或敏感的抗生素的标本作为耐受药物组或敏感药物组,37℃震荡培养,分别提取0、1、2、3、4小时的基因组DNA,以大肠埃希菌特异β-右旋半乳糖苷酶基因的引物和TaqMan探针,对标本进行实时定量PCR检测.结果 实时定量PCR方法有较好的重复性(CT值变异系数0.26%～1.56%)和精确度(大肠埃希菌DNA提取效率在LB培养基中为43.6%,在血中为26.7%),标准曲线线性关系好(R2≥0.998).培养1～3小时后,耐受药物组与生长对照组的大肠埃希菌DNA拷贝数均呈对数增长,在LB液体培养基中增至约19～120倍,在新鲜全血中增至约6～11倍;敏感药物组大肠埃希菌DNA拷贝数呈减少趋势,在LB液体培养基中减至0.22～0.12倍,在新鲜全血中为1.29～0.14倍.上述药敏结果与常规纸片法一致.结论 采用实时定量PCR检测大肠埃希菌在LB液体培养基和健康人全血中对抗生素的药物敏感性,结果与常规纸片法一致,但更快速。