ODDD调节HSV-TK／GCV对乏氧环境宫颈癌Hela细胞特异杀伤作用的研究

目的：构建一种由氧依赖降解结构域（oxygen dependent degradation domain，ODDD）调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶（herpes simplex virus thymidine kinase，HSV-TK）基因表达的真核表达载体，观察ODDD能否使HSV-TK／GCV（gancyclo-vlr）系统对乏氧环境中的宫颈癌Hela细胞有特异杀伤作用。方法：RT-PCR从Hela细胞中钓取ODDD片段，将PCR产物克隆入荧光报告载体pEGFP—C1，获得质粒pEGFP—ODDD；PCR扩增HSV—TK基因，将其克隆到pEGFP—ODDD和pEGFP-C1的下游，获得重组质粒pEGFP—ODDD-TK及pEGFP—TK。荧光报告载体pEGFP—ODDD转染Hela细胞，24h后应用流式细胞术检测在乏氧（O2浓度为1％）和常氧（O2浓度为21％）环境下细胞中EGFP表达强度。将具有相同转染效率的pEGFP—ODDD—TK和pEGFP—TK的Hela细胞分别予以GCV处理，5天后用MTT法检测GCV对培养细胞的杀伤效果。结果：ODDD序列和HSV—TK序列与预期一致；含有ODDD片段荧光报告载体的Hela细胞在正常氧浓度下EGFP的表达量为11．96％，低于缺氧条件下39．92％；在乏氧环境下，转染pEGFP—ODDD-TK的Hela细胞对GCV的敏感性高于正常氧含量组（P〈0．0），而转染pEGFP-TK的Hela细胞在常氧和乏氧环境下对GCV的敏感性差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：成功地构建了含有ODDD序列调控的HSV—TK真核表达载体，ODDD能特异发挥HSV-TK／GCV系统对乏氧环境Hela细胞的杀伤作用。