Establishing a method of loop-mediated isothermal amplification for detecting resistant gene mecA rapidly in clinic sample

目的 建立环介导的等温扩增快速检测葡萄球菌耐药基因mecA的方法.方法利用包被有SPA单克隆抗体的磁珠富集样品中的金黄色葡萄球菌,快速提取其DNA, 用环介导的等温扩增反应(LAMP)扩增金黄色葡萄球菌耐药基因mecA,扩增条件为65°C 保温1 h.在反应过程中,荧光探针与mecA基因的扩增产物互补序列结合,产生荧光,通过检测反应管中的荧光值来判定结果.结果该方法的最低检测限为10 CFU/ml,与M-H培养基苯唑西林药敏试验结果相比较,灵敏性99%,特异性90.9%;而与PCR方法比较,灵敏性100%,特异性100%;试验时间缩短为1 h.结论该方法具有灵敏度高,特异性强,操作简便快速,适用于检测临床标本中的MRSA。