Mapeamento físico de genes expressos de resposta imune e sensorial de Anopheles (Nyssorhynchus) Darlingi, vetor da malária neotropical

A malaria no Brasil ocorre especialmente na Amazonia (99% dos casos), onde as condicoes ambientais sao favoraveis para a proliferacao dos agentes etiologicos e de seus mosquitos vetores, cujo principal transmissor e o Anopheles darlingi. Fatores ambientais e atividades antropicas sao alguns dos principais aspectos que contribuem para o processo adaptativo e evolutivo desse anofelino, o que pode ser refletido em rearranjos cromossomicos. Neste trabalho, realizamos o mapeamento fisico cromossomico por hibridizacao in situ fluorescente (FISH) dos genes de resposta inume do genoma de A. darlingi, GNBP (Gran-negative binding protein), Toll-interacting protein (Toll), defensina, Chymotrypsin-like serine protease (AdChyL), 28S ribosomal protein S7- mitochondrial precursor (RpS7), gambicin anti-microbial peptide (gambicina) e ainda, o gene de resposta sensorial: OBP (odorant binding protein), para auxiliar na montagem mais precisa do seu genoma estrutural. Esses genes foram mapeados em regioes cromossomicas unicas, com excecao do RpS7 que mapeou em mais de um local. Outros genes foram mapeados em regioes de inversao: GNBP (inversao 2Rd); AdChyL, na regiao 38D (inversao 3Lb) e RpS7, na regiao 22C (inversao 2Lb). O gene OBP mapeou o cromossomo X de individuos de cinco localidades, onde apenas A. darlingi de Sao Gabriel da Cachoeira/AM (SGC/AM) o gene OBP marcou na regiao 3A em comparacao com as quatro localidades Coari/AM, Manaus/AM, Barra do Bugres/MT e Macapa/AP, onde a sonda mapeou a regiao 4A. Duas novas inversoes foram descritas, para A. darlingi sendo uma no cromossomo X (Xb) na populacao de SGC/AM e outra no braco 2L (2Lc), populacao de Barra do Bugres/MT. Distâncias geograficas e ecoregioes (barreiras geograficas) sao fatores ambientais que podem favorecer o aparecimento das duas novas inversoes descritas nesse trabalho. Na analise filogenetica dos genes GNBP, Toll, defensina, RpS7 e gambicina, obtivemos tres clados para GNBP e a maioria das sequencias analisadas foi homologa com a da subfamilia B, incluindo GNBP de Anopheles gambiae (87%), sugerindo, que GNBP de A. darlingi pertence a subfamilia B. As arvores filogeneticas para os genes RpS7, gambicina, defensina e Toll mostraram um alto grau de conservacao entre esses genes em A. gambiae e Anopheles arabiensis. Os genes de resposta imune de A. darlingi e Anopheles albimanus sao filogeneticamente proximos, mas nem sempre com um suporte confiavel. Isso pode sugerir algum nivel de conservacao evolutiva entre os genes de resposta imune de ambas as especies. Os genes mapeados in situ foram considerados marcadores citogeneticos uteis aos estudos de variabilidade cromossomica e evolucao em A. darlingi ja que sao genes conservados, alem de auxiliar no aprimoramento das analises de sequencias nao finalizadas na montagem e anotacao do genoma de A. darlingi.