脂肪特异性蛋白27基因的慢病毒载体的构建及其在星状细胞中的表达

我们通过构建脂肪特异性蛋白27( Fsp27)基因的慢病毒载体,并感染活化态肝星状细胞(HSCs),为探讨该基因的抗纤维化作用奠定基础.一、材料与方法1.材料:293T及HSCs由温州医学院实验动物中心提供;病毒构建所需试剂分别购自Genechem公司、Promega公司及TaKaRa公司.2.Fsp27重组表达载体的构建:设计Fsp27基因引物序列,以大鼠cDNA为模板进行聚合酶链反应( PCR)扩增.将PCR产物和载体连接后转化感受态大肠杆菌,对长出的克隆菌落进行PCR鉴定及测序分析.3.慢病毒颗粒的包装和生产:将Fsp27慢病毒与293T细胞的混合培养.收集细胞上清进行病毒滴度测定.收集感染3d后的293T细胞.提取蛋白电泳鉴定。