Transformación del hongo fitopatógeno "Sclerotium cepivorum" Berk empleando fusión de protoplastos = Transformation of the phytopathogenic fungus "Sclerotium cepivorum" Berk using protoplasts fusion

espanolLa pudricion blanca, una de las enfermedades mas preocupantes para los productores de ajo (Allium sativum), es causada por el hongo fitopatogeno Sclerotium cepivorum Berk. Con el fin de desarrollar procedimientos de biologia molecular para el hongo, en este trabajo se describe un metodo de transformacion empleando fusion de protoplastos en presencia de polietilenglicol 3350 (PEG). Se empleo el plasmido pAN7-1 que confiere resistencia a higromicina B, el cual contiene el gen higromicina fosfotransferasa B (hph) de Escherichia coli bajo el promotor gliceraldehido fosfato deshidrogenasa (gpdA) y el terminador antranilato sintetasa (trpC) del hongo filamentoso Aspergillus nidulans. Las transformantes recuperadas en el medio de cultivo de regeneracion papa dextrosa agar-sorbitol (PDA-S) en presencia de 200 ?gmL-1 de higromicina B se analizaron amplificando un fragmento del gen bacteriano hph mediante PCR con oligonucleotidos especificos: Hig 1, Sentido 5' GAC CTG CTG AGG TCC CTC 3' y Hig 2, antisentido 5' GCC CTC GGA CGA GTG CTG 3'. Se obtuvieron frecuencias de 12-18 transformantes de S. cepivorum por ?g de ADN vector. Los resultados descritos en el presente trabajo contribuiran en la caracterizacion molecular de genes involucrados en el fenomeno de patogenesis de S. cepivorum sobre el ajo. EnglishWhite rot, a disease of most concern to the producers of garlic (Allium sativum), is caused by the phytopathogenic fungus Sclerotium cepivorum Berk. In order to develop procedures of molecular biology to the fungus, in this paper we describe a transformation method using fusion of protoplasts in the presence of polyethylene glycol 3350 (PEG). We used the plasmid pAN7-1 which confers resistance to hygromycin B, which contains the hygromycin phosphotransferase gene B (hph) from Escherichia coli under the glyceraldehyde phosphate dehydrogenase promoter (GPDA) and the anthranilate synthase terminator (trpC) of the filamentous fungus Aspergillus nidulans. The recovered transformants in the regeneration medium potato dextrose agar-sorbitol (PDA-S) in the presence of 200 ?gmL -1 of hygromycin B were analyzed by amplifying a fragment of the bacterial gene hph by PCR with specific oligonucleotides: Hig 1, Sentido 5' GAC CTG CTG AGG TCC CTC 3' and Hig 2, antisentido 5' GCC CTC GGA CGA GTG CTG 3'. Obtaining 12-18 frequencies of transformants of S. cepivorum per ?g of vector DNA. The results described in this paper will contribute to the molecular characterization of the genes involved in the phenomenon of pathogenesis of S. cepivorum on garlic.