重组α—N-乙酰半乳糖胺酶工程菌菌种稳定性研究

目的探讨重组α-N-乙酰半乳糖胺酶工程菌菌种的遗传稳定性。方法在有选择压力（AMP^＋）条件下，将重组α-N-乙酰半乳糖胺酶工程菌菌株在LB固体培养基上采用划线法连续传60代，每隔20代取样保存菌种，最后同时进行菌体形态、生长速度和抗生素抗性、质粒稳定性、限制酶切图谱、测序、表达量和酶活力及Western blotting检测。结果第0、20、40、60代菌的菌体形态、生长速度和抗生素抗性等与原代菌株无明显差异；LB固体培养基上传60代后质粒稳定性接近100％；DNA测序未见α-N-乙酰半乳糖胺酶基因变异；SDS—PAGE图谱显示，Ⅱ-NAGA表达水平无明显差别。Western blotting检测显示重组α-NAGA能与抗His的单抗特异结合。结论α-N-乙酰半乳糖胺酶重组质粒pET22b—α-NAGA在工程菌株中具有良好的遗传稳定性。