LC-MS/MS法测定大鼠血浆中黄酮醇糖苷及其主要代谢物

黄酮醇糖苷是处于临床试验阶段的新药，拟用于治疗高脂血症。本文建立了液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）法测定SD大鼠血浆中的黄酮醇糖苷（M0）及其代谢物苷元（M1）和葡萄糖醛酸结合物（M2）：采用 d 6 -黄酮醇糖苷作为内标，血浆样品经甲醇（含0.2%甲酸）沉淀蛋白后，通过XDB C 18 （50 mm×4.6 mm，1.8 μm）色谱柱分离，以去离子水（含0.2%甲酸）-甲醇为流动相梯度洗脱，色谱运行时间为4.5 min。采用电喷雾电离源（ESI），以多反应监测模式（MRM）检测。用于定量分析M0、M1和M2的离子对分别为 m / z 461.3→ m / z 299.1、 m / z 299.1→ m / z 283.1和 m / z 475.0→ m / z 299.1，用于定量分析内标 d 6 -黄酮醇糖苷的离子对为 m / z 467.3→ m / z 305.1。本方法经验证后，成功应用于SD大鼠药动学研究。SD大鼠灌胃给予黄酮醇糖苷30 mg·kg -1 后，M0的 C max 为（341±106）ng·mL -1 、AUC 0- t 为（1 960±725）h·ng·mL -1 ，M1在血浆中的含量低于分析方法的定量下限2 ng·mL -1 ，无法测定相应浓度计算 C max 和AUC 0- t ，M2的 C max 为（1 720±843）ng·mL -1 、AUC 0- t 为（8 510±2 920）h·ng·mL -1 ，M2的 C max 约为M0的5.0倍，AUC 0- t 约为M0的4.3倍。结果表明，SD大鼠灌胃给予黄酮醇糖苷后，在体内主要以原形M0和代谢物M2的形式存在，且M2的暴露量显著高于M0，推测黄酮醇糖苷经口服给药后在体内经肠菌群水解成苷元形式被吸收，经历较强的首过代谢后，M1进一步生成葡萄糖醛酸结合物。本文首次测定了黄酮醇糖苷在大鼠血浆中的主要代谢物，为临床药动学试验设计提供了依据。