TGF-β1／Smad3信号通路调控小鼠成釉细胞Amelotin启动子转录活性的研究

[摘要]目的：研究TGF-β1／Smad3信号通路对调控小鼠成釉细胞Amelotin启动子转录活性的影响。方法：首先利用双荧光素酶报告基因检测系统分析TGF-β1和Smad3对小鼠Amelotin启动子转录活性的影响；然后利用染色体免疫共沉淀（ChIP）方法观察Smad3与Amelotin启动子特异性结合位点之间的相互作用；最后利用基因定点突变构建Smad3结合位点突变型Amelotin启动子，并用双荧光素酶报告基因检测系统分析TGF-β1和Smad3对野生型和突变型Amelotin启动子转录活性的影响。结果：TGF—β1和Smad3作用于成釉细胞后，Amelotin启动子转录活性明显增强（P〈0．05）；Smad3与Amelotin基因启动子的“AGAC”及“GTCT”序列有相互作用；将Amelotin启动子上Smad3结合位点特征性序列突变为“TGTC”和“GACA”后，TGF—β1和Smad3对突变型Amelotin基因启动子转录活性的影响较野生型明显减弱（P〈0．05）。结论：TGF-β1／Smad3信号通路通过作用于Smad3结合位点调控成釉细胞Amelotin基因启动子的转录活性。