人甲状旁腺激素（1-34）突变蛋白的设计与活性验证

通过对NCBI数据库中不同物种同源序列进行比对protein-protein BLAST,并利用计算机软件DiscoveryStudio3.1进行分子对接和分子动力学模拟,对天然人甲状旁腺激素（1 34）的3个氨基酸R25K26K27进行Q25E26L27置换,并对突变体的生物活性进行了评价。结果显示：突变后PTH（1 34）-（RKK-QEL）和突变前PTH（1 34）多肽主链叠合后均方根偏差RMSD值为2.509 3,说明两者主链结构构象差异不大;PTH（1 34）-（RKK-QEL）与受体蛋白PTH1R的相互作用能为599.253 kcal.mol 1,较天然PTH（1 34）的554.083 kcal.mol 1增强7.5%;氢键数目由32对增加至38对;PTH（1 34）-（RKK-QEL）能显著刺激UAMS-32P细胞RANKL基因的表达（P〈0.01）,并抑制OPG基因的表达（P〈0.01）;PTH（1 34）-（RKK-QEL）作用于UAMS-32P和小鼠原代股骨骨髓细胞共培养体系时,能显著刺激破骨细胞的形成（P〈0.01）,并且活性高于PTH（1 34）标准品。