沉默AQP-5表达对结肠癌细胞株HT-29凋亡影响机制探讨

目的 通过抑制内源性水通道蛋白（AQP-5）的表达,探讨AQP-5对HT-29细胞凋亡及凋亡抑制蛋白（inhibitaors of apoptosis proteins,IAPs）表达的影响.方法 体外常规培养人结肠癌HT-29细胞,通过siRNA技术抑制内源性AQP-5的表达,并经蛋白质印迹法检测AQP-5-siRNA转染效率;采用MTT法检测各组细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率;荧光实时定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染AQP-5-siRNA的HT-29细胞IAPs家族成员c-IAP1、c-IAP2、XIAP、NAIP、Survivin和Livin表达水平.结果 蛋白质印迹法检测结果显示,转染AQP-5-siRNA的HT-29细胞AQP-5表达下调达90％.MTT分析结果显示,与转染NS-siRNA组细胞增殖抑制率（1.13±0.11）％相比,AQP-5-siRNA组的HT-29细胞增殖抑制率显著增加,高达（27.9±5.16）％,t=12.705,P＜0.001;流式细胞分析结果发现,与NS-siRNA组细胞凋亡率（0.99±0.18）％相比,AQP-5-siRNA组的HT-29细胞凋亡率显著增加,高达（10.81±1.32）％,t=-12.767,P＜0.001.荧光实时定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测结果显示,与转染NS-siRNA组相比较,AQP-5-siRNA组c-IAP1（t=-3.232,P=0.018）、c-IAP2（t=-0.651,P=0.001）、XIAP（t=-9.296,P＜0.001）和Livin（t =-8.07,P＜0.001）的mRNA表达水平下降,AQP-5-siRNA组c-IAP1（t=-0.591,P=0.007）、c-IAP2（t=-4.889,P=0.008）、XIAP（t=-6.487,P=0.003）和Livin（t=-6.216,P=0.003）蛋白表达水平也下降,其中以XIAP下降最明显;Survivin和NAIP表达变化不明显.结论 AQP-5-siRNA可体外促进HT-29细胞凋亡,其机制可能与下调c-IAP1、c-IAP1、XIAP和Livin mRNA及蛋白表达有关.