沉默AQP-5表达对结肠癌细胞株HT-29凋亡影响机制探讨
2015
目的 通过抑制内源性水通道蛋白(AQP-5)的表达,探讨AQP-5对HT-29细胞凋亡及凋亡抑制蛋白(inhibitaors of apoptosis proteins,IAPs)表达的影响.方法 体外常规培养人结肠癌HT-29细胞,通过siRNA技术抑制内源性AQP-5的表达,并经蛋白质印迹法检测AQP-5-siRNA转染效率;采用MTT法检测各组细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率;荧光实时定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染AQP-5-siRNA的HT-29细胞IAPs家族成员c-IAP1、c-IAP2、XIAP、NAIP、Survivin和Livin表达水平.结果 蛋白质印迹法检测结果显示,转染AQP-5-siRNA的HT-29细胞AQP-5表达下调达90%.MTT分析结果显示,与转染NS-siRNA组细胞增殖抑制率(1.13±0.11)%相比,AQP-5-siRNA组的HT-29细胞增殖抑制率显著增加,高达(27.9±5.16)%,t=12.705,P<0.001;流式细胞分析结果发现,与NS-siRNA组细胞凋亡率(0.99±0.18)%相比,AQP-5-siRNA组的HT-29细胞凋亡率显著增加,高达(10.81±1.32)%,t=-12.767,P<0.001.荧光实时定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测结果显示,与转染NS-siRNA组相比较,AQP-5-siRNA组c-IAP1(t=-3.232,P=0.018)、c-IAP2(t=-0.651,P=0.001)、XIAP(t=-9.296,P<0.001)和Livin(t =-8.07,P<0.001)的mRNA表达水平下降,AQP-5-siRNA组c-IAP1(t=-0.591,P=0.007)、c-IAP2(t=-4.889,P=0.008)、XIAP(t=-6.487,P=0.003)和Livin(t=-6.216,P=0.003)蛋白表达水平也下降,其中以XIAP下降最明显;Survivin和NAIP表达变化不明显.结论 AQP-5-siRNA可体外促进HT-29细胞凋亡,其机制可能与下调c-IAP1、c-IAP1、XIAP和Livin mRNA及蛋白表达有关.
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