Improved detection of Mycobacterium leprae rifampin resistance with nested-PCR

目的 提高检测麻风菌的利福平耐药基因(rpoB)的敏感性.方法设立含聚合酶链反应增效剂(Q-solution)试验组和无PCR反应增效剂对照组,以比较增效剂对PCR的影响;采用巢式PCR,对第一轮PCR未扩增出rpoB基因390bp片段的标本,再进行第二轮PCR,扩增出rpoB突变集中区域的193bp片段;之后用双脱氧链终止法,对阳性PCR产物直接测序.结果Q-solution可显著提高PCR的敏感性,但是常规PCR检测rpoB基因的敏感性仅为45.2%.在确立巢式PCR最佳条件后,使用Q-solution可使其敏感性提高至90.5%.结论PCR反应增效剂和巢式PCR相结合可明显提高检测rpoB的敏感性和特异性。