Identificación y caracterización de células tumorales circulantes (ctcs) como herramienta pronóstica y predictiva en pacientes con cáncer de próstata

El cancer de prostata (CaP) constituye un claro ejemplo de la necesidad de nuevos biomarcadores y de la importancia del desarrollo de la biopsia liquida. Este tumor presenta una historia natural heterogenea, probablemente debida a distintos cambios geneticos y selecciones clonales a lo largo de su evolucion y de su tratamiento. En otros tumores, la biopsia tisular del tumor, o de sus metastasis, permiten descifrar biomarcadores pronosticos y predictivos con mas facilidad; sin embargo, la principal metastasis del CaP es al hueso, lo cual supone una importante barrera en la obtencion de muestras para su analisis y monitorizacion molecular. Por ello, la biopsia liquida a traves del analisis de celulas circulantes del tumor (CTCs) se plantea como una potencial solucion a este problema. Las CTCs han demostrado de manera contundente su valor como marcadores pronosticos independientes en el CaP metastasico. Sin embargo, hasta la fecha se han realizado muy pocos estudios que analicen el papel de las CTCs en el CaP localizado, debido principalmente a la baja tasa de deteccion de estas celulas en los momentos iniciales de la enfermedad. No obstante, pensamos que la literatura a este respecto es escasa y muy heterogenea y que la baja tasa de deteccion puede ser debida a una tecnologia todavia con margen de optimizacion. Sobre este escenario, planteamos un estudio, basado en la practica clinica habitual urologica, con el objetivo de tratar de comprender mejor el potencial pronostico de las CTCs en el momento diagnostico del CaP. Del mismo modo, tambien tratamos de identificar distintas subpoblaciones celulares de CTCs en el momento inicial de la enfermedad. Para este estudio se incluyeron pacientes con sospecha clinica de CaP e indicacion de biopsia prostatica diagnostica segun un screening individual de PSA (PSA > 4ng/mL con cociente PSA l/t <20%). Las muestras sanguineas para el analisis de CTCs se obtuvieron inmediatamente antes de realizar la biopsia. Ademas, tambien determinamos conocidos marcadores de CaP (receptor de factor de crecimiento epidermico o EGFR, y receptor de androgenos o RA) en el tejido prostatico y distintos polimorfismos geneticos de cambio de nucleotido simple (SNPs) en la sangre de los pacientes. Posteriormente, analizamos las relaciones de todos ellos con la presencia de CTCs. Las CTCs se aislaron mediante tecnica inmunomagnetica empleando anticuerpos anti-citoqueratina especificos y siguiendo el protocolo especifico de nuestro grupo. Para identificar distintas subpoblaciones de CTCs se estudio la expresion o no de RA en estas celulas. La expresion de EGFR y RA en el tejido se realizo mediante Real-Time PCR. Se seleccionaron 8 SNPs (rs56250729, rs486907, rs627928, rs11545302, rs17552022, rs5030739, rs4792311 y rs3747531) por su relacion con el CaP y su prevalencia en poblacion caucasica. Un total de 86 pacientes fueron incluidos para el estudio y se obtuvo una tasa de deteccion de CTCs del 18.6%. La sensibilidad, especificidad y valores predictivos positivo y negativo de la presencia de CTCs para detecta cancer de prostata fueron de 14.2%, 78.4%, 31.2% y 57.4%, respectivamente. La mayoria de las CTCs (75%) fueron CTC RA-negativas. Observamos una relacion inversa, no significativa estadisticamente, entre la expresion de EGFR en el tejido y la expresion de RA en las CTCs. No obstante, este resultado a nivel clinico es congruente con evidencias experimentales previas, que muestran una relacion inversa entre el EGFR y el RA en las CTCs. De forma muy interesante, comprobamos una relacion directa, esta vez si estadisticamente significativa (p<0.05), entre la expresion de RA en el tejido prostatico y la presencia de CTCs en sangre periferica. Este resultado tambien esta sustentado por evidencia reciente a nivel experimental, que ha demostrado como los androgenos son capaces de inducir procesos EMT en lineas celulares de CaP, lo cual es un paso fundamental para adquirir la capacidad de migracion y potencial invasion a distancia. Por ello, nuestros resultados sugieren que un incremento en la expresion de RA en la prostata podria ser un facilitador del proceso de diseminacion celular a sangre periferica. Probablemente dado el bajo tamano muestral, no encontramos ninguna asociacion significativa entre los SNPs y las CTCs. Como conclusiones: • La baja tasa de deteccion de CTCs en el CaP localizado limita su papel como marcador diagnostico. Sin embargo, en este trabajo de tesis hemos demostrado que estas celulas pueden proporcionar valiosa informacion pronostica y/o predictiva, ya que se pueden detectar distintas subpoblaciones de CTCs (RA-positivas o RA-negativas) incluso en los primeros momentos tras el diagnostico de la enfermedad. • El RA parece guardar una relacion intima con el proceso de diseminacion de las CTCs. Teniendo en cuenta que a via de los androgenos es la principal diana terapeutica de esta enfermedad, creemos que nuestros resultados justifican profundizar la investigacion con CTCs en estadio localizado de CaP. No obstante, dada la baja tasa de deteccion, es preciso ampliar las cohortes de pacientes e ir mas alla de su mera enumeracion, estudiando nuevas formas de caracterizacion que aporten valor predictivo y pronostico a estas celulas. • Los biomarcadores circulantes (basicamente CTCs y tambien ctDNA) hicieron su aparicion hace 10 anos y, desde entonces, el desarrollo de nuevas tecnicas de deteccion y la publicacion de resultados traslacionales han crecido a un ritmo exponencial. A pesar de ello, aun no han conseguido hacerse un hueco en la practica clinica habitual. Probablemente, esto sea debido precisamente a la desbordante y heterogenea cantidad de informacion disponible. Resulta muy complejo reproducir de los resultados de los distintos estudios, e igualmente dificil compararlos sistematicamente para poder llegar a conclusiones de impacto clinico fiables. Por ello, es necesario el consenso y la unificacion de criterios. En este sentido, resultan de enorme importancia la aparicion de sociedades cientificas como la International Society of Liquid Biopsy (ISLB) que promocionen encuentros de consenso especificos y que faciliten el co-working y la investigacion colaborativa.