绒山羊成纤维细胞生长因子5基因（FGF5）毛囊特异性表达载体的构建及转染胎儿成纤维细胞

绒山羊的绒毛品质、产量与皮肤毛囊的生长发育密切相关。本研究旨在构建绒山羊（Capra hircus）成纤维细胞生长因子5基因（fibroblast growth factor 5, FGF5）的毛囊特异性表达载体，并证明其表达的有效性。分别以绒山羊基因组和cDNA为模板，利用PCR方法克隆角蛋白关联蛋白6-1（keratin associated protein 6-1, KAP6-1）基因的启动子和FGF5基因的编码区序列（coding sequence, CDS），并将这两个元件连接到去除CMV启动子的真核表达载体pEGFP-N1上，FGF5与增强绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein, EGFP）基因表达框之间以猪捷申病毒（Porcine teschovirus, PTV）2A（P2A）相连，构建毛囊特异性表达载体pEGFP-N1-KF。表达载体转染绒山羊胎儿成纤维细胞后，对细胞表达产物进行qRT-PCR和Western blot检测。酶切鉴定结果表明，载体pEGFP-N1-KF构建成功；qRT-PCR结果表明， FGF5正常表达；Western blot结果显示，P2A能够有效剪切FGF5和EGFP融合蛋白。表明成功得到了绒山羊FGF5基因的毛囊特异性表达载体并在绒山羊胎儿成纤维细胞中能正常表达。本实验为进一步研究绒山羊FGF5基因在毛囊发育和周期调控中的作用提供了技术支持。