HIV-1蛋白酶基因的克隆、蛋白表达及抗体制备

目的为了研究HIV-1蛋白酶的生物学活性，制备HIV—1PR蛋白及其特异性抗体。方法用PCR方法扩增编码PR的基因序列，将其克隆到原核表达载体pET28a（＋）中，并表达HIV-1PR蛋白，用His抗体为一抗做Westernblot鉴定目的蛋白。以纯化的目的蛋白为抗原免疫日本大耳白兔，制备多克隆抗体。通过酶联免疫吸附实验（ELISA），免疫细胞化学法检测抗体滴度及其特异性。结果原核表达载体pET28a（＋）-PR成功构建，并可在大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达，得到的PR蛋白经SDS—PAGE和Westernblot鉴定正确。用纯化蛋白免疫家兔，制备的多克隆抗体具有较强免疫特异性。结论得到纯化的HIV-1PR蛋白，制备的多克隆抗体能够检测自然状态下病毒蛋白PR，为进一步研究HIV-1奠定了实验基础。