CAD-15: Les cellules stromales pancréatiques humaines immortalisées améliorent la fonction des îlots humains

Introduction Grâce a leurs proprietes immunomodulatrices, anti-inflammatoires et regeneratrices, les cellules stromales mesenchymateuses (CSM) peuvent optimiser la qualite des ilots pancreatiques en vue d'une transplantation. Apres avoir immortalise et selectionne des cellules au profil fibroblastique issues d'ilots humains (FIPi), notre objectif est i) de caracteriser ces cellules, ii) d'etudier leur effets sur la fonction des ilots iii) de determiner si elles secretent des proteines matricielles. Materiels et Methodes Des ilots pancreatiques humains ont ete isoles a partir de pancreas de donneurs decedes. Des FIPi ont ete immortalisees apres transduction par le virus hTERT. Ces cellules ont ensuite ete caracterisees par FACS, immunohistochimie et RT-qPCR. Differentes preparations d'ilots humains ont ensuite ete co-cultives avec ces FIPi dans des conditions permettant ou non les contacts intercellulaires. Apres 4 jours de culture, la secretion d'insuline a ete mesuree par ELISA, apres incubations statiques. Les proteines secretees par les FIPiont ete analysees par western-blotting. Resultats Les FIPi adherent au plastique, conservent une morphologie fibroblastique et expriment les marqueurs de surface mesenchymateux CD73, CD90 et CD105. Les analyses histologiques montrent que les FIPi se differencient en osteocytes apres 21 jours de culture en condition d'osteogenese. L'analyses des transcrits montre une augmentation de l'expression des marqueurs adipogeniques (LPL, FABP4, PPARg) et chondrogeniques (Sox9, aggrecane, collagene IIb) lorsque les cellules sont cultivees dans les milieux appropries. Les experiences de co-culture montrent que l'index de stimulation est augmente de 163,3 % ( n =4), lorsque les ilots sont en contact avec les FIPi. Enfin, les isoformes IV et VI du collagene ainsi que la laminine-332 ont ete identifiees, a la fois sur le plastique, apres decellularisation des cellules adherentes, et dans les surnageants de culture. Conclusions Les FIPi presentent un profil proche des CSM et ameliorent la fonction des ilots lorsque les contacts intercellulaires sont favorises. Ces cellules secretent des proteines matricielles retrouvees dans le pancreas, autour et dans l'ilot. Ces resultats suggerent que les FIPi sont des cellules stromales pancreatiques susceptibles de creer un environnement favorable au maintien des ilots en culture.