کلونینگ ژن InvG از باکتری سالمونلا انتریکا در حامل pET32a و بررسی بیان آن در میزبان BL21- DE3

باكتري سالمونلا يكي از عوامل ايجاد بيماريهاي عفوني و به عنوان يك بيماري مشترك در انسان و حيوانات، از لحاظ بهداشتي و اقتصادي داراي اهميت فراوان است، كه تا كنون واكسن براي آن توليد نشده است. ژن InvG به سبب ساختاري و به عنوان يكي از ژن هاي اصلي تشكيل دهنده سيستم ترشحي نوعIII و همچنين قرار گرفتن در غشاء باكتري، نقش مهمي را در اتصال اوليه باكتري به سلول ميزبان دارد. هدف اصلي از پژوهش حاضر بيان پروتئين نوتركيب InvG و معرفي آن به عنوان يك ادجوانت موثر جهت DNA واكسن بود. در اين پژوهش با طراحي آغازگر اختصاصي و استفاده از روش PCR ،ژن InvG باكتري سالمونلا تكثير گرديد. پس از تخليص، ژن فوق در ناقل پلاسميدي (+)pET32a جهت بيان كلون شد. سپس پلاسميدي نوتركيب InvG-pET32a وارد باكتري اشريشياكلي سويه DE3- BL21 گرديد. به منظور توليد پروتئين نوتركيب در سيستم بياني، باكتري حاوي پلاسميد بياني و ژن هدف (InvG (با استفاده از IPTG القاء شد. نتايج توالي يابي نشان داد كه توالي ژن تكثير شده در حامل بياني pET32a كلون شده با ترادف ثبت شده براي ژن InvG در بانك ژن يكسان بود. توليد پروتئين نوتركيب با القاء IPTG به ميزبان حاوي پلاسميد InvG -pET32a با موفقيت انجام گرفت. تاييد بيان ژن InvG در اين سيستم بياني، توسط آناليز PAGE-SDS و دات بلاتينگ انجام گرديد. پژوهش حاضر نشان داد توليد پروتئين نوتركيب InvG در ميزبان اشريشياكلي امكان پذير است و پروتئين توليد شده، وزني در حدود 81 كيلو دالتون دارد.