Caracterização taxonômica de espécies do gênero Xanthomonas

Especies pertencentes ao genero Xanthomonas sao responsaveis por doencas que podem causar grandes perdas economicas em diversas culturas. Esses fitopatogenos tem sido objeto de diversos estudos taxonomicos resultando em significativas alteracoes na classificacao em nivel inter e infraespecifico. O presente estudo teve por objetivo caracterizar taxonomicamente bacterias do genero envolvendo: (1) diferenciacao e analises filogeneticas de especies do genero Xanthomonas; (2) esclarecimento da posicao taxonomica de linhagens classificadas como Xanthomonas sp.; (3) diferenciacao de patovares da especie X. campestris; (4) desenvolvimento de primers especificos para X. campestris, X. translucens, X. cucurbitae e X. melonis. O par de primers rpoB2F/rpoB3R, desenhado a partir de sequencias do gene rpoB, foi empregado em experimentos de amplificas;ao utilizando-se DNAs de 26 especies do genero Xanthomonas e os produtos de amplificas;ao (800 pb) foram digeridos com diversas endonucleases. Os perfis de restricao obtidos com a utilizacao da enzima Hae III permitiram a diferenciacao da maioria das especies, incluindo os patogenos de mesmo hospedeiro como X. albilineans e X. sacchari (patogenicas a cana-de-acucar); X. cucurbitae . e X. melonis (patogenicas ao melao); X. vesicatoria, X. gardneri e X. euvesicatoria/X. perforans (patogenicas ao tomateiro). Ainda, os produtos de amplificacao do gene rpoB foram sequenciados e a arvore filogenetica construida a partir destas sequencias tambem possibilitou a diferenciacao das especies do genero, indicando que o gene rpoB pode ser considerado um marcador molecular eficiente para o estudo das relacoes filogeneticas de especies do genero Xanthomonas. Os DNAs de linhagens classificadas como Xanthomonas sp. tambem foram analisados por meio de experimentos de amplificacao com primers especificos para a especie X. axonopodis, de hibridizas;ao DNA-DNA, e analise de multilocus utilizando-se sequencias dos genes rpoB, rpoA, atpA, recA e regiao espacadora 16S-23S DNAr. Os resultados mostraram que as linhagens de X. sp. pv. viticola, X. sp. pv. betae e X. sp. pv. paulliniae pertencem a especie X. axonopodis, entretanto, nao foi possivel definir a posicao taxonomica das linhagens de X. sp. pv. arracaciae, X. sp. pv. esculenti e X. sp. pv. eucalypti, embora varias ferramentas tenham sido utilizadas. Assim, somente estudos complementares deverao ser conduzidos visando esclarecer a classificacao dessas linhagens. Nesse estudo tambem foram analisadas as especies X. campestris, X. translucens, X. cucurbitae e X. melonis. Visando a diferenciacao dos patovares da especie X. campestris, os DNAs destas linhagens foram submetidos a experimentos de PCR-RFLP do gene rpoB e as digestoes duplas utilizando-se Cfo I/Mbo I. Os resultados permitiram a diferenciacao dos patovares X.c. pv. raphani, X.c. pv. barbariae, X.c. pv. incanae, X.c. pv. armoraciae e X.c. pv. campestris/ X.c. pv. aberrans. Ainda, os dados obtidos nas amilises do gene rpoB permitiram o desenvolvimento de primers especificos para as especies X. campestris, patogenicas as cruciferas (rpoB2F/xcamR) e X. translucens, patogenicas a gramineas e cereais (trans1F/trans2R). Alem disso, amilises de sequencias da regiao espacadora 16S-23S DNAr possibilitaram o desenho do par de primers mecF/mecR, especifico para X. cucurbitae e X. melonis, especies patogenicas ao melao. A especificidade destes primers foi confirmada em experimentos de amplificacao utilizando-se DNAs de algumas bacterias de diferentes generos isoladas de mesma especie de plantas hospedeiras. O nivel de sensibilidade da tecnica de PCR utilizando-se os primers desenvolvidos foi de 0,1 pg para rpoB/xcam, de 0,01 ng para trans1F/trans2R e de 1 pg para mecF/mecR. Abstract