(G1510434张笠)聚乙烯醇和卵泡液添加方式对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的影响-初审0330 修改文章2

本试验研究目的在于 探讨在猪卵母细胞体外成熟 (IVM) 过程中聚乙烯醇 (polyvinyl alcohol, PVA) 和猪卵泡液 (porcine follicular fluid , PFF) 添加方式对猪卵母细胞体外成良 TCM-199+10% FBS+0.1% PVA (PMH-PVA) 成熟液中培养 22~23 h ；再移至无 HCG 和 PMSG 的 PM-PFF 或 PM-PVA 的成熟液中成熟培养至 44 h 。试验： (1) 处理组 1- 使用 PMH-PFF 培养 22~23 h 后，更换 PM-PFF 继续培养至 44 h ； (2) 处理组 2- 使用 PMH-PFF 培养 22~23 h 后，更换 PM-PVA 继续培养至 44 h ； (3) 处理组 3- 使用 PMH-PVA 培养 22~23 h 后，更换 PM-PVA 继续培养至 44 h ； (4) 处理组 4- 使用 PMH-PVA 培养 22~23 h 后，更换 PM-PFF 继续培养至 44 h 。将在不同成熟体系中 IVM 44 h 后的卵母细胞进行固定染色，鉴定卵母细胞核和细胞质成熟情况熟及孤雌激活早期胚胎发育的影响。卵母细胞、卵丘细胞复合体 (COCs) 在含有 HCG 和 PMSG 的改良 TCM-199+10% FBS+10% 猪卵泡液 (PMH-PFF) 或改；对在不同处理组的成熟液中成熟培养 44 h 的卵母细胞进行孤雌激活后放入 PZM-3 中培养，分别于第 2 天、第 7 天统计分裂率和囊胚发育率。结果表明：经 44 h 成熟培养后，处理组 1 卵母细胞核成熟率 ( 42.00% ) 显著低于处理组 2 (64.67%) 、处理组 3 ( 69.00 %) 、处理组 4 ( 64.33% ) 核成熟率 (p<0.05) 。处理 1 、处理 2 、处理 4 的卵母细胞皮质颗粒分布类型 III 比例 (62.00%/54.67%/46.67%) 均高于处理组 3 (28.67%) ，且处理组 1 、处理组 2 卵母细胞皮质颗粒分布类型 III  比例显著高于处理组 3 卵母细胞皮质颗粒分布类型 III 比例 (p<0.05) 。 处理组 1 、处理组 2 、处理组 4 孤雌分裂率 (81.92%/76.00%/73.33%) 均高于处理组 3 (69.00%) 。处理组 3 孤雌激活囊胚率 (9.67%) 显著低于处理组 1 (23.33%) 、处理组 2 (25.00%) 、处理组 4 (23.00%)-(p<0.05) 。结果表明，在本研究条件下，处理组 2 的各项指标均优于其它组， IVM 液中添加猪卵泡液培养 22~23 h 后更换添加有 PVA 的 IVM 液继续培养至 44 h ，更有利于促进 IVM 猪卵母细胞核成熟、胞质成熟以及早期孤雌胚胎发育。